Detection of Mycobacterium in clinical samples by multiprimer polymerase chain reaction

ABSTRACT

We investigated the use of multiprimer-PCR for detection of mycobacteria species in clinical samples. Three different mycobacterial genomic fragments were investigated the IS6110 insertion sequence, present in M. tuberculosis complex; the genus specific fragment (32kDa); and from M. tuberculosis species-specific mtp40 gene. The sensitivity and specificity using 135 clinical isolates were 94.5% and 95.9%, respectively, compared with culture in Löwenstein-Jensen medium; the detection limit was 0.05ng of DNA. In conclusion, this assay is reliable and rapid for detection of Mycobacterium species in clinical samples, and differentiates M. tuberculosis from M. bovis strains in a single-step assay.

RESUMO

PCR utilizando vários oligonucleotídeos para detecção de espécies de micobactérias em espécimes clínicas foi padronizado. Três diferentes fragmentos genômicos da seqüência de inserção IS6110, presente no complexo M. tuberculosis, do gene responsável por proteína específica (32kDa) do gênero e do gene mtp40 espécie-específico do M. tuberculosis foram estudados. A sensibilidade e especificidade do método em 135 amostras clínicas foram de 94.5% e 95.9%, respectivamente, comparados com os resultados da cultura em meio Löwenstein-Jensen, e o limite de detecção foi de 0.05 ng of DNA. O ensaio mostrou-se confiável e rápido para detecção de espécies de Mycobacterium em amostras clínicas, diferenciando M. tuberculosis de M. bovis em uma única reação.