A VP3/VP1 gene polymerase chain reaction assay for detection of chicken anemia virus in broiler samples / Teste de reação em cadeia de polimerase dos genes VP3 e VP1 para detecção do vírus da anemia das galinhas em amostras de campo

ABSTRACT

A PCR assay was designed for amplification of the highly conserved VP3 gene and a 5' region of the VP1 gene, for the diagnosis of CAV in organ samples of broiler flocks suspected of chicken infectious anemia. A comparison of the VP3/VP1 PCR with in vivo virus isolation revealed 100% agreement of the results, with 13 positive and 3 negative samples in both assays, indicating that the VP3/VP1 PCR is a specific diagnostic method. Tissues from additional 24 broiler chicken flocks, with CAV-like lesions and clinical history were then tested only by the VP3/VP1 PCR and a reference PCR with published primers for the VP1 gene. Nineteen samples resulted positive and one negative in both PCR, while another 4 samples were positive only in the VP3/VP1 PCR. These results indicate that the VP3/VP1 PCR is a sensitive, specific diagnostic test, suitable as an alternative to the expensive and time consuming in vivo virus isolation method, specially considering the difficult diagnosis of CAV strains not readily adaptable to MSB-1 cell culture.(AU)

RESUMO

Desenvolveu-se uma reação em cadeia de polimerase (PCR) para amplificação do altamente conservado gene VP3 e da região 5' do gene VP1, para o diagnóstico do vírus da anemia das galinhas (CAV), diretamente em amostras de campo de órgãos de frangos de corte com suspeita clínica da doença. A comparação entre o PCR VP3/VP1 com isolamento viral in vivo indicou 100% de concordância dos resultados, com 13 amostras positivas e três negativas em ambos os testes. Órgãos de outros 24 lotes de frangos com lesões e história clínica compatível com CAV foram testados com o PCR VP3/VP1 e com um PCR de referência com primers conhecidos para o gene VP1. Dezenove amostras resultaram positivas e uma negativa em ambos os PCR e quatro foram positivas apenas no PCR VP3/VP1. Estes resultados indicam que o PCR VP3/VP1 é um teste de diagnóstico sensível e específico, aplicável como alternativa ao método caro e demorado de isolamento viral in vivo e especialmente considerando-se amostras do CAV não adaptáveis a cultivos de células MSB-1.(AU)