Interação do Mycoplasma bovigenitalium com células do cumulus in vitro após o período de maturação oocitária bovina

ABSTRACT

The Mycoplasma is considered cosmopolitan and can be disseminated through international trade of animals, industrialized semen and embryo transfer products. The expansion of cumulus cells is used as a parameter for evaluating cattle oocytes cultivated in vitro, and their morphological changes are representative. The aim of the present study was to evaluate the interaction of Mycoplasma bovigenitalium with primary-culture cumulus cells, after the in vitro maturation period. Cumulus complex oocytes (COCs) obtained through follicular puncture of ovaries from a cattle slaughterhouse were divided into two groups to be matured for 24 hours in the maturation medium (TCM 199 + hormones) in a climate controlled chamber at 38º C, 5% CO2, and 95% humidity. Subsequently, the oocytes were removed from the plates, which remained with only the cumulus cells attached. With the monostratum cell formed, one group was infected with 30 ºL (5 x 10(6) cells/mL) M. bovigenitalium, replicated in modified Hayflick medium at 37º C in a mycroaerofilic chamber, while the other was kept as a control. The results showed that with 24 hours of exposure to the pathogen, the cultures showed a small number of rounded and grainy cells, when compared to the controls. This effect persisted until the 7th day, when a process of cell detachment began. It can be concluded that a mycoplasma contamination may be imperceptible to the manipulations of FIV, because cells infected by this group of bacteria present no cloudiness in the culture field, and when they do not lyse the host cell, they make it more susceptible to environment and other infectious agents.

RESUMO

O Mycoplasma é considerado cosmopolita, podendo ser disseminado através do comércio internacional de animais, sêmen industrializado e de produtos de transferência de embriões. A expansão de células do cumulus é utilizada como parâmetro de avaliação de oócitos bovinos cultivados in vitro e suas alterações morfológicas são representativas. O objetivo deste trabalho foi avaliar a interação do Mycoplasma bovigenitalium, exposto experimentalmente à cultura primária de célula do cumulus, após o período de maturação. Complexos oócitos cumulus (COCs) obtidos através de punção folicular de ovários bovinos, provenientes de abatedouro, foram divididos em dois grupos para serem maturados durante 24h em meio de maturação (TCM199 + hormônios) em estufa a 38º C, 5% de CO2, 95% de umidade. Posteriormente, os oócitos foram retirados das placas, permanecendo somente com as células do cumulus aderidas. Com o monoestrato celular formado, um grupo foi infectado com 30 mL de M. bovigenitalium, replicado em meio Hayflick modificado a 37º C em estufa de microaerofilia, enquanto o outro foi mantido como controle. Os resultados mostraram que, com 24h de exposição ao patógeno, as culturas apresentaram um pequeno número de células arredondadas e granulosas, quando comparadas as dos controles. Esse efeito persistiu até o sétimo dia, onde se iniciou um processo de descolamento das células. Pode-se concluir que uma contaminação por micoplasma pode ser imperceptível às manipulações da FIV, pois células infectadas por esse grupo de bactérias não apresentam turvações no meio de cultura e, quando não lisam a célula hospedeira, tornam mais suscetível ao ambiente e outros agentes infecciosos.