Description of ultrastructural damages in frozen-thawed canine spermatozoa / Descrição de danos ultraestruturais em espermatozoides caninos congelados-descongelados

ABSTRACT

In spite of the advances in transmission electronic microscopy (TEM), there are few studies presenting a systematic description of the canine spermatozoa and they are only focused on sperm cell heads. The goal of the present study was to describe ultrastructural appearance of canine fresh and frozen-thawed spermatozoa, focusing on damages induced by freezing-thawing in different sperm regions. Ten ejaculates from five proven stud dogs (two ejaculates/dog) were collected, evaluated, extended in Tris-egg yolk-glycerol, frozen and stored in liquid nitrogen, and thawed six weeks later.  Samples were evaluated for progressive motility, morphology, and for ultrastructural analysis by TEM. Concerning to TEM, the most striking differences between fresh and frozen-thawed samples were observed over the mid-piece since the fresh spermatozoa showed a well preserved mid-piece. However, the frozen-thawed spermatozoa mid-piece showed signs of damage such as mitochondrial vacuolization. In conclusion, freezing-thawing processes using a Tris-egg yolk extender induce ultrastructural damages in head and mid-piece of canine sperm, affecting the mitochondrial ultrastructure besides.KEY WORDS Cryopreservation, dog, semen, ultrastructure.

RESUMO

Apesar dos avanços na microscopia eletrônica de transmissão (MET), existem poucos estudos apresentando uma descrição sistemática do espermatozoide canino, os quais estão focados apenas na cabeça espermática. Objetivou-se, com o presente estudo, descrever a aparência ultraestrutural do espermatozoide canino fresco e congelado-descongelado, enfocando os danos induzidos pela congelação e descongelação em diferentes regiões espermáticas. Dez ejaculados obtidos de cinco cães (dois ejaculados por cão) foram coletados, avaliados e diluídos em Tris-gema-glicerol, congelados e armazenados em nitrogênio líquido, e descongelados seis semanas após. Avaliaram-se as amostras quanto à motilidade progressiva, morfologia espermática e análise ultraestrutural por MET. Em relação à MET, as principais diferenças entre o espermatozoide fresco e descongelado foram observadas na peça intermediária, visto que o espermatozoide fresco apresentava uma peça intermediária bem preservada. Entretanto, a peça intermediária dos espermatozoides descongelados mostrava sinais de danos como a vacuolização das mitocôndrias.  Em conclusão, os processos de congelação e descongelação utilizando o diluente Tris-gema induzem danos ultraestruturais na cabeça e peça intermediária de células espermáticas caninas, afetando, inclusive, a ultraestrutura das mitocôndrias. PALAVRAS-CHAVES Cão, criopreservação, sêmen, ultraestr