Comparative evaluation between the extenders TES-TRIS and ACP-112® and the association of Sálva Marajó oil (Lippia origanoides) in the quality of cryopreserved buffalo sperm / Avaliação comparativa entre os diluidores TES-TRIS e ACP-112® e a associação com o óleo da Sálva do Marajó (Lippia origanoides) na qualidade do sêmen bubalino criopreservado

ABSTRACT

For artificial insemination, it is essential to use frozen semen, however the freezing process causes deleterious changes to the structure and integrity of sperm membranes that compromise the function of sperm. To avoid this cellular damage, extenders and suitable substrates must be used to recover the highest possible number of viable cells post-thaw. To this end, in the first experiment, we evaluated three different extenders TES-TRIS, which is widely used for buffaloes; and an extender composed of powdered coconut water-based (ACP-112®) with or without milk (ACP-112®-milk) for buffalo semen freezing. In the second experiment, we evaluated the effect of Lippia origanoides oil extract on protecting buffalo sperm against cryoinjury arising from freezing semen. Semen was collected from ten buffalo bulls (10 ejaculates/bull) and diluted in TES-TRIS (control), ACP-112® or ACP-112®-Milk in the first experiment. In the second experiment, the samples were diluted in the diluent with the best results for sperm quality obtained in experiment I, and 2.5 μg mL-1, 5 μg mL-1 or 10 μg mL-1 of the plant extract was added to treatments; and a control group containing only the diluent was also included. The fresh semen was analyzed for conventional features such as motility, concentration, morphology and viability. After thawing, the samples were evaluated again for motility, vigor and supra-vital staining, and then, were performed the of thermal-resistance test, hypoosmotic test and evaluated sperm membrane integrity with the fluorescent probes PI, FITC-PSA and JC-1 using flow cytometry. The data were submitted to ANOVA, and the results were compared by Tukeys test at a significance of 5%.(AU)

RESUMO

Para a implantação da inseminação artificial é indispensável à utilização de sêmen congelado, que pode provocar mudanças deletérias na estrutura e na integridade das membranas espermáticas, comprometendo sua função. Para evitar estes danos celulares, há a necessidade de se utilizar meios diluidores e substratos adequados que recuperem o maior número possível de células viáveis pós-descongelação. Para isso, foram avaliados, no experimento I, três diferentes diluidores, o diluidor TES-TRIS, bastante utilizado para bubalinos, e um diluidor a base de água de coco em pó (ACP-112), associado ou não ao leite (ACP-112-Leite), na congelação do sêmen de bubalinos; e no experimento II, foi avaliado o efeito do óleo extraído da Lippia origanoides na proteção dos espermatozóides contra as crioinjúrias decorrentes da congelação do sêmen bubalino. Foram utilizados 10 touros bubalinos para as colheitas de sêmen (10 ejaculados/touro), sendo os ejaculados diluídos em TES-TRIS (controle), ACP-112 e ACP-112-Leite no experimento I; e no experimento II, os ejaculados foram diluídos no melhor diluidor obtido no experimento I, acrescido de 2.5 μg mL-1, 5 μg mL-1 e 10 μg mL-1 da planta e o grupo controle, constituído somente do diluidor. O sêmen recém colhido foi analisado quanto as características convencionais, tais como, motilidade, concentração, morfologia e viabilidade. Após a descongelação das amostras foram avaliados novamente, motilidade e viabilidade espermática, e posteriormente, foram realizados os testes de termo-resistência, hiposmótico e de avaliação das membranas dos espermatozóides, através das sondas fluorescentes PI, FITC-PSA e JC-1, utilizando a citometria de fluxo. Os dados obtidos foram submetidos à ANOVA e ao Teste de Tukey a 5%.(AU)