Detection of agents associated with respiratory diseases of swine by real time PCR

ABSTRACT

Porcine Respiratory Disease Complex (PRDC) is a group of diseases that cause high losses in the swine industry. Several infectious agents are related to PRDC including porcine circovirus 2 (PCV-2), pseudorabies virus (SuHV-1),Haemophilus parasuis (HP), Mycoplasma hypneumoniae (MH) and Pasteurela multocida (PM). The aim of this study was to develop real-time PCRs (qPCR) for the detection of these infectious agents. Oligonucleotides were designed for each specific infectious agent and labeled with different fluorophores to amplify specific parts of the genome. This was done in two groups of reactionsa duplex qPCR for SuHV-1 and PCV-2 and a multiplex qPCR to detect the three bacteria simultaneously. The reactions were tested in 142 pooled samples of swine lymph nodes and lungs with clinical signs of PRDC. There were 135 samples that tested positive for PCV-2, 61 for HP, 29 for PM, 30 for MH and zero for SuHV-1. We recorded 76 cases of co-infection. The qPCRs developed in this study are useful tools in the diagnosis of PRDC.

RESUMO

Complexo de Doenças Respiratórias de Suínos (CDRS ) é um grupo de doenças que causam grandes perdas na indústria suína. Vários agentes infecciosos estão relacionados com a CDRS , entre eles o circovírus suíno 2 (PCV -2), vírus da pseudo-raiva (SuHV -1) , Haemophilus parasuis (HP) ,Mycoplasma hypneumoniae (MH ) e Pasteurela multocida (PM). O objetivo com este estudo foi desenvolver PCR em tempo real (qPCR) para a detecção destes agentes infecciosos. Os oligonucleotídeos foram concebidos para cada agente infeccioso específico e marcado com fluoróforos diferentes para amplificar partes específicas do genoma em dois grupos de reacções , uma qPCR dúplex em SuHV -1 e PCV- 2 e uma qPCR multiplex para detectar as três bactérias simultaneamente. As reações foram testadas em 142 amostras de pools de linfonodos e pulmões de suínos com sinais clínicos de CDRS. Foram detectadas 135 amostras positivas para PCV- 2 , 61 para a HP, 29 para PM e 30 para MH e zero para SuHV -1, dentre esses foram registrados 76 casos de co-infecção . As qPCRs desenvolvidas neste estudo são ferramentas úteis no diagnóstico da CDRS.