Assessment of FTA card employment for Pasteurella multocida DNA transport and detection of virulence-associated genes in strains isolated from fowl cholera in the United States / Avaliação do emprego de cartões FTA para o transporte do DNA de Pasteurella multocida e pesquisa de genes associados à virulência em cepas isoladas de cólera aviária nos Estados Unidos

ABSTRACT

Fowl Cholera (FC) is a disease caused by Pasteurella multocida. The severity of this disease is partly caused by virulence factors. Genes encoding fimbriae, capsule, sialidases and proteins for iron metabolism may be related to P. multocida's ability to infect the host. Besides to examining DNA for the presence of virulence genes, DNA is essential for the diagnostic and FTA cards are an alternative for genetic material transport. The study aims to evaluate the viability of P. multocida DNA transport using the cards and to detect 14 virulence genes in 27 strains isolated from FC cases in the United States by multiplex-PCR. No growth was observed in any of the FTA cards, which was essential to assess the security. Furthermore, DNA detection was possible in 100% of the samples, independent of the storage period (7 to 35 days) and temperature (4°C and 37°C). ptfA, exbd-tonB, hgbA, nanB, oma87, hyaD-hyaC, sodC, hgbB, sodA, nanH and pfhA genes were detected in more than 80% of the samples. FTA cards have proven to be a viable and safe tool for DNA transport of P. multocida. A majority of genes showed a high frequency, which was similar to strains isolated from FC cases.(AU)

RESUMO

Cólera aviária (CA) é uma doença causada pela bactéria Pasteurella multocida e a severidade dos casos é em parte justificada por fatores de virulência. Genes codificando fímbrias, cápsulas, sialidases, dismutases e proteínas do metabolismo férrico podem ser relacionados à capacidade do agente em infectar o hospedeiro. Além da obtenção do DNA para pesquisa de genes de virulência, o material genético é fundamental para o diagnóstico, e os cartões FTA seriam uma alternativa no transporte de microrganismos. Os objetivos da presente pesquisa foram avaliar a viabilidade do transporte de DNA de P. multocida através dos cartões e detectar 14 genes de virulência em 27 cepas isoladas de CA nos Estados Unidos, por meio de multiplex-PCR. Nenhuma das amostras para análise microbiológica da segurança dos cartões apresentou crescimento. Foi possível a detecção do DNA em 100% das amostras, independentemente do tempo de estocagem (sete a 35 dias) e das temperaturas (4°C e 37°C) avaliadas. Genes ptfA, exbd-tonB, hgbA, nanB, oma87, hyaD-hyaC, sodC, hgbB, sodA, nanH e pfhA foram detectados em mais de 80% das amostras. Os cartões FTA demonstraram ser uma ferramenta viável e segura para o transporte do DNA de P. multocida. A maioria dos genes apresentou uma alta frequência, compatível com isolados de CA.(AU)