Epitelización inducida por células troncales derivadas del tejido adiposo / Induced epithelialization by adipose tissue derived stem cells

RESUMEN

El tratamiento de lesiones con pérdida de tejido cutáneo ha mejorado notablemente con el advenimiento de la bioingeniería tisular. Una alternativa en desarrollo es la utilización de sustitutos dérmicos combinados con células troncales derivadas del tejido adiposo autólogo. Estudios previos nos muestran que con esta técnica es posible optimizar la angiogénesis y la síntesis de colágeno, sin embargo potenciar la epitelización es un tema pendiente por resolver. En el presente estudio evaluamos la progresión y diferenciación epitelial en un período de tiempo prologando. Obtuvimos las células troncales a partir del tejido adiposo (ASC) de la región inguinal de 4 ratas Sprague Dawley. Cultivamos las células frescas en una matriz de Integra(R) durante un período total de 48 horas, y las marcamos con un vector lentiviral-GFP (proteína fluorescente verde). Posteriormente, injertamos en las mismas ratas la matriz dérmica con células troncales y un implante contralateral sin células, como control. A las 4 semanas, evaluamos el avance epitelial mediante planimetría de superficie e histología. Los resultados macroscópicos muestran que el cierre de la herida por contracción de los bordes no tiene diferencias significativas (82,63% ± 3,4% vs. 80,66% ± 3,89%; p = 0,08), pero el cierre por epitelización fue significativamente mayor en el lado intervenido con ASCs (93,47% ± 5,98% vs. 79,88% ± 6,28%; p = 0,0028). Todas las muestras obtuvieron tinción positiva para el anticuerpo anti-citoqueratina 34²E12 y el avance epitelial lineal cuantificado por microscopía resultó significativamente mayor en el lado con ASCs (6408 ± 275¼m vs. 5375 ± 250¼m; p < 0,001). Identificamos las células GFP positivas formando parte de la dermis regenerada, no así en la epidermis. En conclusión, las células troncales derivadas del tejido adiposo autólogo sembradas en una matriz de Integra(R) aumentan la formación epitelial significativamente, probablemente por un mecanismo de inducción más que de diferenciación (AU)

ABSTRACT

The treatment of injuries with loss of skin tissue has improved significantly with the advent of bioengineered tissue. Previous studies showed that the use of dermal substitutes combined with autologous Adipose-derived Stem Cells (ASCs) improve angiogenesis and collagen synthesis; however, epithelialization is an outstanding issue to be resolved. In the present study, we evaluated the epithelial progression and differentiation in an extended period of time. We obtained the adipose tissue derived stem cells (ASCs) from the inguinal fat pad of 4 Sprague Dawley rats. The non-expanded cells were cultivated in a dermal scaffold (Integra® ) for 48 hours and marked with a green fluorescent protein (GFP) lentiviral vector. The scaffold plus stem cells and a contralateral cell-free scaffold (control) were implanted in the same rats. After 4 weeks, epithelial surface was assesses by planimetry and histology. The results show that macroscopic wound closure by contraction from the edges has no significant differences (82.63% ± 3.4% vs. 80.66% ± 3.89%, p = 0.08), but the closure by epithelialization was significantly higher in the side with stem cells (93.47% ± 5.98% vs. 79.88% ± 6.28%, p = 0.0028). All samples were positive for staining with anti-cytokeratin antibody 34²E12 and linear epithelial advancement quantified by microscopy was significantly higher in the side with stem cells (6408 ± 275¼m vs. 5375 ± 250¼m, p < 0.001). GFP positive cells were identified as part of the regenerated dermis but not the epidermis. In conclusion, the autologous adipose tissue derived stem cells seeded in a Integra® scaffold significantly increase epithelial formation, most likely by an induction mechanism rather than affecting differentiation (AU)