Uso combinado de amplificación aleatoria de polimorfis model ADN (RAPD) y reacción en cadena de la polimerasa (touchdown PCR) en el estudio epidemiológico de Aspergillus fumigatus / Combined used of RAPD and touchdown PCR for epidemiological studies of Aspergillus fumigatus

RESUMEN

INTRODUCCIÓN. Aspergillus fumigatus es un hongo filamentoso que se comporta como patógeno oportunista y constituye una de las complicaciones infecciosas más importantes en los pacientes inmunocomprometidos. Los brotes nosocomiales de aspergilosis son cada vez más frecuentes, pero su identificación y caracterización epidemiológica es lenta y laboriosa. OBJETIVO. Describir un método rápido, sensible y específico para la identificación de A. fumigatus y su caracterización genotípica dentro de las posibilidades diagnósticas habituales en un laboratorio clínico de microbiología. MÉTODOS. Se utilizaron cepas de A. fumigatus procedentes de pacientes con aspergilosis invasivas (n = 4), medio ambiente hospitalario (n = 5) y colecciones de referencia (n = 1), así como otras especies fúngicas filogenéticamente próximas aisladas de pacientes (n = 1), del medio hospitalario (n = 6) o de colecciones de referencia (n = 1). La identificación de A. fumigatus se realizó tanto por métodos fenotípicos clásicos como mediante touchdown PCR (reacción en cadena de la polimerasa). La caracterización genotípica se llevó a cabo por RAPD (polimorfismo derivado de la amplificación aleatoria de ADN), comparando distintos protocolos de amplificación y tipos de primer (OPZ-19 y R-108) en relación con su poder resolutivo y reproducibilidad. RESULTADOS. Los resultados de la identificación fenotípica y molecular coincidieron plenamente. La caracterización molecular por RAPD presentó los mejores resultados, en cuanto a reproducibilidad y resolución se refiere, con el primer R-108 y tiempo prolongado de transición entre hibridación y elongación. CONCLUSIÓN. El análisis por RAPD es un método seguro y rápido para la caracterización genotípica de A. fumigatus cuyos patrones de bandas son fáciles de interpretar y reproducir cuando se prolonga drásticamente el tiempo de transición entre la hibridación y la extensión. El uso combinado de touchdown PCR y análisis por RAPD constituye un método sensible y exacto para la resolución de brotes nosocomiales por A. fumigatus (AU)