Aggregatibacter actinomycetemcomitans y Fusobacterium nucleatum en biopelículas subgingivales de pacientes brasileños con y sin enfermedad periodontal: comparación de dos métodos de detección / Aggregatibacter actinomycetemcomitans and Fusobacterium nucleatum in subgingival biofilms from Brazilian patients with and without periodontal disease: comparison of two detection methods

RESUMEN

Objetivo: Realizar la detección comparativa de cepas de A. actinomycetemcomitans y F. nucleatum de muestras subgingivales por los métodos de cultivo y de reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Métodos: Fueron evaluados 50 pacientes con periodontitis crónica (P) y 50 pacientes sanos (S). Las muestras fueron colectadas de bolsas periodontales y surcos gingivales. El cultivo bacteriano fue realizado en agar tripticasa de soya-suero de caballo-bacitracina-vancomicina, e incubado en anaerobiosis. La identificación bac-teriana fue por métodos bioquímicos de fermentación de carbohidratos y por PCR. Resultados: Por el método de cultivo, de las 50 muestras de periodontitis, 9 (18%) fueron positivas para A. actinomycetemcomitans aislándose 17 cepas. También, de esas muestras, 10 (20%) fueron positivas para F. nucleatum aislándose 19 cepas. De las 50 muestras de pacientes sanos, solamente 1 (2%) fue positiva para A. actinomycetemcomitans obteniéndose 2 cepas, y 12 (24%) positivas para F. nucleatum con 18 cepas. Por PCR fueron observadas diferencias en la detección de A. actinomycetemcomitans, entre los tres pares de partidores utilizados, para muestras de bolsa periodontal y surco gingival partidor AA, 96% y 86%; partidor FU, 48% y 42%; y partidor ASH, 24% y 6%. Los porcentajes de detección para F. nucleatum de muestras de P y S fueron partidor FN-5047, 36% y 18%; y partidor 505-S, 8% para ambas muestras colectadas. Cepas de A. actinomycetemcomitans biotipo II fueron las más prevalentes. Conclusiones: El método de PCR fue más sensible y específico en la detección bacteriana que el cultivo. Palabras clave Aggregatibacter actinomycetemcomitans; Fusobacterium nucleatum; Bacterias anaerobias gram-negativas; Periodontitis.

ABSTRACT

Objective: A comparative detection of strains of A. actinomycetemcomitans and F. nucleatum directly from subgingival samples was performed by culture and polymerase chain reaction (PCR) methods. Methods: Fifty patients with chronic periodontitis (P) and 50 healthy patients (S) were evaluated. Subgingival samples were collected from periodontal pockets and gingival sulcus. Bacterial culture was performed on trypticase soy-horse serum-bacitracin-vancomycin agar and incubated in anaerobiosis. Bacterial identification was done by biochemical methods of carbohydrate fermentation and by PCR. Results:By culture method, of the 50 samples of periodontitis, 9 (18%) were positive for A. actinomycetemcomitans isolating 17 strains. Also, of these samples, 10 (20%) were positive for F. nucleatum isolating 19 strains. Of the 50 samples from healthy patients, only 1 (2%) was positive for A. actinomycetemcomitans, obtaining 2 strains, and 12 (24%) positive for F. nucleatum with 18 strains. Differences were observed in the detection of A. actinomycetemcomitans among the three pairs of primers used, for periodontal pocket and gingival sulcus samples primer AA, 96% and 86%; primer FU, 48% and 42%; and primer ASH, 24% and 6%. The percentages of detection for F. nucleatum of samples from P and S were primer FN-5047, 36% and 18%; and primer 505-S, 8% for both samples collected. Strains of A. actinomycetemcomitans biotype II were the most preva-lent. Conclusions: The PCR method was more sensitive and specific in the bacterial detection than the culture. Keywords Aggregatibacter actinomycetemcomitans; Fusobacterium nucleatum; Gram-negative anaerobic bacteria; Periodontitis.