Atividade antimicrobiana do extrato de semente de uva Vitis vinifera sobre biofilme de Enterococcus faecalis: análise com microscopia confocal / Antimicrobial effectiveness of grape seed extract against Enterococcus faecalis biofilm: confocal microscopy analysis

RESUMO

As limitações dos irrigantes químicos utilizados em endodontia têm incentivado novas pesquisas acerca de substâncias alternativas para serem utilizadas no tratamento endodôntico. Estudos anteriores sugerem que o extrato de semente de uva (Vitis vinifera), tem atividade antimicrobiana assim como é eficaz no combate a cepas de Enterococcus faecalis. No entanto, os efeitos deste novo irrigante em biofilmes microbianos ainda não foram elucidados. Dessa forma, o objetivo deste estudo foi avaliar e quantificar o grau de desinfecção da dentina contaminada por biofilme de E. faecalis após irrigação com extrato de semente de uva Vitis vinífera 6,5% por meio de análise microscopia confocal a laser. A clorexidina (CHX) 2% e o hipoclorito de sódio (NaOCl) 5,25% foram utilizados como irrigantes para comparação. Foram confeccionadas quarenta amostras de discos de dentina que foram contaminadas com E. faecalis e incubadas por um período de 21 dias para formação do biofilme. As amostras foram divididas em diferentes grupos de acordo com o irrigante testado após transcorrido o período de contaminação grupo NaOCl, grupo CHX, grupo Vitis vinifera e grupo solução salina (controle). Após a irrigação, os discos de dentina foram corados com o corante fluorescente LIVE/DEAD BacLight e analisados por microscopia confocal à laser para determinar a proporção de células mortas no biofilme. A aquisição das imagens e quantificação do biofilme foi realizada utilizando-se o software LAS X. Uma distribuição normal dos dados foi confirmada pelo teste Shapiro- Wilk (p>0,05). Por esse motivo, a análise estatística foi realizada utilizando-se One-way análise de variância. Comparações Post hoc pair-wise foram realizadas utilizando-se o teste Tukey para múltiplas comparações (P<0.05). O grupo no qual o NaOCl foi utilizado como irrigante apresentou maior quantidade de células bacterianas mortas do que os dos outros irrigantes (P<0,05). Já o grupo da Vitis vinifera demonstrou maior morte bacteriana quando comparada a CHX e ao grupo controle (P<0,05). Não foram observadas diferenças entre a CHX e o grupo controle (P>0,05). A irrigação com o extrato de semente de uva, vitis vinífera, apresentou atividade antimicrobiana sobre o biofilme de E. faecalis sendo esta inferior a apresenta pelo NaOCl e superior a apresentada pela CHX.

ABSTRACT

The limitations of chemical irrigants used in endodontics have encouraged further research on alternative substances to be used in endodontic treatment. Previous studies have suggested that grape seed extract (Vitis vinifera), an irrigant of natural origin, is effective against strains of Enterococcus faecalis. The aim of this study was to evaluate and quantify the degree of disinfection of dentin contaminated by E. faecalis biofilm after irrigation with Vitis vinifera grape seed extract 6,5% and to compare it with chlorhexidine (CHX) 2% and Sodium hypochlorite (NaOCl) 5,25% by confocal microscopy laser. Forty samples of dentin disks that will be contaminated with E. faecalis and incubated for a period of 21 days for biofilm formation were prepared. The samples were divided into different groups according to the irrigant tested after the period of contamination NaOCl group, CHX group, Vitis vinifera group and control group . After irrigation, the dentin disks were stained with the fluorescent dye LIVE / DEAD BacLight and analyzed by laser confocal microscopy to determine the proportion of dead cells in the biofilm. The acquisition of the images and quantification of the biofilm was performed using the software LAS X. Normal distribution of the data was confirmed by Shapiro- Wilk test (p>0.05). Therefore, statistical analysis was performed using One-way analysis of variance. Post hoc pair-wise comparisons were performed using Tukey's test for multiple comparisons (P<0.05). NaOCl presented a higher amount of bacterial cells killed than the other irrigators (P <0.05). Irrigation with grape seed extract, Vitis vinifera, showed antimicrobial activity on the E. faecalis biofilm, being lower than that presented by NaOCl and higher than that presented by CHX.