Análise comparativa da expressão global de genes em mucosa gástrica normal e tumoraL / Comparative analysis of global gene expression in normal and tumoral gastric mucosa

RESUMO

O estudo do câncer gástrico é de grande importância tendo em vista a sua alta taxa de incidência e mortalidade em todo o mundo. As estimativas do Instituto Nacional do Câncer (INCA) para 1999 mostram que o câncer de estômago provocou o maior número de óbitos por câncer no Brasil. Hoje, o maior avanço no entendimento do câncer gástrico advêm de estudos relacionando o processo de oncogênese com a infecção por H. pylorí. O tratamento da infecção com antibióticos levou a uma redução significativa na incidência de câncer gástrico em países desenvolvidos, como o Japão e os EUA. Em países em desenvolvimento, como o Brasil, essa queda foi menos significativa devido a uma grande incidência de casos de re-infecção. A identificação de genes diferencialmente expressos no tecido gástrico normal e tumoral permitirá a descoberta de marcadores genéticos indicadores da evolução do processo de transformação celular. Considerando que as alterações morfológicas, hoje a base do diagnóstico, são consequentes de alterações moleculares, os métodos de diagnóstico baseados no perfil de expressão gênica poderão ser capazes de identificar lesões pré-malignas. Além disso, a determinação do perfil molecular de um tumor poderá determinar um regime de tratamento de forma tumorespecífica. Com isso, os estudos de análise de expressão gênica podem contribuir significativamente para a descoberta de marcadores moleculares de câncer. Neste trabalho, comparamos a expressão global de genes entre amostras de tecido gástrico normal e tu moral. Através do DDRT -PCR, recuperamos cerca de 50 bandas com perfil diferencial. A busca de homologia foi feita no banco de dados e cerca de 45°/o dos clones apresentaram homologia com sequências nucleotídicas de genes conhecidos e 31,6% apresentaram homologia com ESTs (Etiquetas de Análise comparativa da expressão global de genes em mucosa gástrico normal e tumoral Sequências Expressas). Cerca de 23, 7°/o não apresentaram nenhuma homologia significativa e portanto, podem representar novos genes. Identificamos, duas proteínas ribossomais denominadas de L26 e L27. A expressão de L26 foi encontrada em amostra tumoral e é um importante marcador para a diferenciação entre um adenocarcinoma pouco diferenciado e um linfoma gástrico. Encontramos uma sequência homóloga ao gene da Mucina 4 (MUC4). Sabe-se que há um aumento na expressão de MUC4 em câncer de estômago e as mucinas sintetizadas pelas células malignas podem contribuir para a capacidade de invasão das células tumorais, favorecendo o surgimento de metástases. Identificamos também, através do DDRT -PCR, o RNA mensageiro para a enzima Aflatoxina-p 1 Aldeído Redutase (AFAR) sendo expressa em uma amostra tumoral. Esta enzima está envolvida no mecanismo de detoxificação da aflatoxina. O que justifica um estudo das suas funções biológicas na mucosa gástrica. Este é o primeiro relato na literatura mostrando a expressão de AFAR na mucosa gástrica. O perfil de expressão deste gene entre mucosa gástrica normal e tumoral se mostrou variado. Será necessário uma amostragem maior para concluírmos sobre o perfil de expressão de AFAR e a sua utilização como marcador molecular. Entre os 18.376 clones analisados através do cDNA microarray, 150 clones apresentaram diferenças de expressão de, no mínimo, cinco vezes entre mucosa gástrica normal e tumoral. Um dos clones encontrados corresponde a uma sequência de cDNA denominada de SMSO. Através de uma análise por RT -PCR, SMSO apresentou maior nível de expressão em mucosa gástrica tumoral em relação à mucosa normal em quatro de sete pacientes analisados. Todas as seqüências identificadas irão compor um "microarray" e o seu nível de expressão será avaliado em diferentes amostras de mucosa gástrica normal e tumoral. A partir deste estudo, poderemos identificar os genes relacionados com o desenvolvimento do câncer gástrico e viabilizar um diagnóstico molecular