Identification of enteric viruses from raw water using fluoro-immuno-magnetic separation coupled to RT-PCR / Identificación de virus entéricos en aguas crudas usando separación inmuno-magnética acoplada a RT-PCR

ABSTRACT

Abstract | Introduction: Enteric viruses have been associated with the production of a variety of diseases transmitted by the fecal-oral route and carried through contaminated food and water. Given their structure and composition, they are highly resistant to environmental conditions and most of the chemical agents used in the purification processes. Therefore, the systematic monitoring of raw water is necessary to ensure its quality especially when it is used for producing drinking water for human consumption. Objective: We identified the presence of rotavirus and hepatitis A virus by means of the fluoro-immuno-magnetic separation technique (FIMS) in raw water taken from four purification plants and their water supplies in the department of Norte de Santander. Materials and methods: The viruses were captured and separated from the water samples using magnetic microparticles functionalized with monoclonal anti-Hepatitis A and anti-Rotavirus antibodies. Confocal microscopy was used to monitor the viral concentration process and transmission electron microscopy for the morphological visualization of the separated viruses. The reverse transcriptase-coupled polymerase chain reaction (RT-PCR) was applied to confirm the presence of pathogens. Results: The two enteric viruses were identified in the majority of the analyzed water samples including water supply sources. Conclusion: We determined that the FIMS technique together with RT-PCR is highly effective for the detection of viral pathogens in complex matrices such as raw water.

RESUMEN

Resumen | Introducción. Los virus entéricos se asocian con una serie de enfermedades transmitidas por vía fecal-oral en alimentos o agua contaminada. Dada su estructura y composición, son muy resistentes a las condiciones ambientales y a la mayoría de los agentes químicos empleados en los procesos de potabilización, por lo cual es necesario un monitoreo sistemático del agua cruda para asegurar su calidad, máxime cuando se emplea como materia prima en la producción de agua potable para consumo humano. Objetivo. Determinar la presencia de rotavirus y del virus de la hepatitis A mediante la técnica de separación fluoro-inmuno-magnética en agua cruda procedente de cuatro plantas de potabilización y sus fuentes hídricas en el departamento de Norte de Santander. Materiales y métodos. Los virus fueron capturados y separados a partir de las muestras de agua, empleando micropartículas magnéticas funcionalizadas con anticuerpos monoclonales anti-hepatitis A y anti-rotavirus. Se empleó microscopía confocal para hacer el seguimiento del proceso de concentración viral y, microscopía electrónica de transmisión, para la visualización morfológica de los virus separados. La reacción en cadena de la polimerasa acoplada a transcriptasa inversa (RT-PCR) se utilizó para confirmar la presencia de los patógenos. Resultados. Los dos virus entéricos se detectaron en la mayoría de las muestras de agua analizadas, incluidas las de sus fuentes hídricas. Conclusión. La técnica de separación fluoro-inmuno-magnética acoplada a RT-PCR fue altamente efectiva en la detección de patógenos virales en matrices complejas como el agua cruda.