Saliva sampling methods. Cariogenic streptococci count using two different methods of saliva collection in children / Recuento de estreptococos cariogénicos a partir de dos métodos de obtención de saliva en niños

ABSTRACT

ABSTRACT The aim of this study is to compare the efficacy of two methods for collecting saliva samples from infants under 2 years of age for cariogenic streptococci (CS) count. Two collection methods were applied in 11 infants. In Method (A), saliva samples were collected by swabbing the inner cheek mucosa and floor of the mouth in figure of eight motions with a sterile cotton swab until it was soaked. In method (B), saliva samples were collected by aspiration of 1 ml of saliva with a sterile plastic syringe on the floor of the mouth, after stimulation with glove. The samples were cultured in modified Gold's broth (MSMG), and on trypticase, yeast extract, sucrose, cystine and bacitracin culture medium (TYSCB). In method (A), the swab with the sample was unloaded in situ on TYSCB and placed in PBS medium for transport. Then, 100 μl of the eluate was seeded in MSMG. In method (B) 100 μl were seeded in TYSCB and 100 μl in MSMG. Both culture media were incubated under capnophilic conditions for 48 hours at 37 °C. Colony forming units (CFU/ml) were counted by calibrated operators (kappa = 0.75). The presence of cariogenic streptococci (CS) (Streptococcus mutans-Streptococcus sobrinus) was determined by qPCR in the samples collected by both methods. The CFU/ml counts in MSMG differed significantly between methods (p = 0.021). In TYSCB, the recovery of CFU/ml was higher in method (A), without significant difference (p = 0.705). The molecular technique detected presence of CS, with no difference between collection methods. Collecting saliva samples by swabbing proved more effective in terms of recovery of microorganisms, and did not affect the detection of presence of CS by molecular techniques.

RESUMEN

RESUMEN El objetivo de este estudio es comparar la eficacia de dos métodos de obtención de muestras salivales, en infantes menores de 2 años para el recuento de estreptococos cariogénicos (EC). Se aplicaron dos métodos de recolección en 11 infantes, el método (A), consistió en la recolección de muestras de saliva con hisopos de algodón estériles, realizando movimientos en ocho sobre la mucosa del carrillo y piso de boca, hasta embeber el hisopo. En el método (B) la recolección de las muestras se realizó por aspiración con jeringa plástica estéril en piso de boca hasta obtener 1 ml, luego de estimulación con guante. Las muestras fueron cultivadas en caldo de Gold modificado (MSMG) y medio de cultivo TYSCB (tripticasa, extracto de levadura, sacarosa, cistina y bacitracina). En (A), el hisopo con la muestra fue descargado in situ en TYSCB y colocado en medio de transporte PBS. 100 μl del eluato se sembró en MSMG. En (B) 100 μl fueron sembrados en TYSCB y 100 μl en MSMG. Ambos medios de cultivo fueron incubados en condiciones de capnofilia por 48 hs. a 37°C. El recuento de unidades formadoras de colonias (UFC/ml) se realizó por operadores calibrados (kappa= 0.75). La presencia de EC (Streptococcus mutans - Streptococcus sobrinus) fue determinada por qPCR en las muestras obtenidas por ambos métodos. Los resultados mostraron que los recuentos de UFC/ml en MSMG presentaron diferencias significativas entre ambos métodos (p=0.021) En TYSCB la recuperación de UFC/ml fue mayor en el método (A), sin observarse diferencias significativas (p=0.705). Se detectó la presencia de EC por técnica molecular, sin mostrar diferencias entre los métodos empleados. La recolección de muestra de saliva con hisopo presentó mayor eficacia en términos de recuperación de microorganismos, sin alterar la detección de presencia de EC por técnicas moleculares.