Impacto do status da infecção pelo vírus de Epstein-Barr e do perfil de instabilidade de microssatélites no prognóstico de pacientes portadores de adenocarcinomas gástricos / Impact of Epstein-Barr virus infection status and microsatellite instability profile on the prognosis of patients with gastric adenocarcinomas

RESUMO

A determinação acurada do prognóstico tumoral ainda é um desafio no tratamento oncológico. Estudos sugerem que dois dos subtipos moleculares de adenocarcinomas gástricos (AdGs), talvez tenham melhor prognóstico quando comparados aos demais aqueles caracterizados pela presença do vírus Epstein-Barr (AdG-EBV) e aqueles com instabilidade de microssatélites de DNA (AdG-MSI). No Brasil, a distribuição destes subtipos ainda não foi profundamente investigada, e não sabemos o impacto prognóstico dos mesmos na nossa população, que possui aspectos étnicos e epidemiológicos próprios. O objetivo deste trabalho é determinar a prevalência e a relevância clínica/prognóstica dos subtipos EBV e MSI, em uma coorte de pacientes portadores de AdG tratados no A.C.Camargo Cancer Center. A coorte incluiu 198 pacientes diagnosticados entre 2016 a 2020, dos quais foram coletadas amostras de biópsias tumorais (195/198) e fluidos gástricos (167/198). A presença do DNA de EBV foi avaliada por qPCR e o status de MSI foi determinado a partir de dados de sequenciamento de exoma das amostras tumorais (MSIseq/NGS classifier). Na avaliação prognóstica utilizamos análise de sobrevida pelo método de Kaplan-Meier e Log Rank (R v. 4.1.2). Para as análises estatísticas utilizamos principalmente os testes de qui-quadrado e exato de Fisher na análise de fatores clínicos (SPSS v. 25). A prevalência observada na coorte para EBV+ e MSI+ foi exatamente a mesma 7,1% (14/198 casos), similar a outros relatos da literatura. A média de idade para pacientes EBV+ e EBV- foi similar (respectivamente, 60 e 61,7 anos), e o sexo predominante para os dois grupos foi o masculino (85,7% para EBV+ e 60,3% para EBV-). Quanto aos casos MSI+, a média de idade foi de 74,3 anos e maioria do sexo feminino (71,4%, p= 0,016), enquanto os pacientes MSI- tiverem média de 60,6 anos e o sexo masculino prevalente (64,7%). A distribuição dos casos EBV+ e MSI+ quanto aos subtipos de Lauren, foi respectivamente, 9 28,6% e 69,2% para intestinal, 57,1% e 15,4% para difuso, e 14,3% e 15,4 % para o subtipo misto. Observamos relação significativa entre esta classificação e o status MSI (p=0,017), mas não para a presença de EBV. O impacto prognóstico foi avaliado pela sobrevida câncer específica (CE) e sobrevida livre de recidiva em 05 anos nas condições (A) excluindo os casos metastáticos ao diagnóstico e (B) excluindo também os com estadiamento TNM IV. Não observamos diferenças estatísticas entre os grupos, o que talvez seja fruto de uma casuística ainda limitada frente à baixa frequência de EBV e MSI em nossa população. Entretanto, os casos EBV+ não apresentaram recidiva da doença, sugerindo um impacto positivo da presença de EBV. Além disso, avaliamos a relação entre a ancestralidade genômica e os AdGs EBV e MSI, onde a ancestralidade predominante principal foi a europeia, seguida da asiática, mas não observamos efeito da ancestralidade quanto ao prognóstico dos subtipos. Ademais, avaliamos a carga mutacional tumoral (CMT) e as assinaturas mutacionais onde se destacou a associação com o status MSI+, grupo no qual foram identificadas as assinaturas correspondentes à deficiência em MMR e idade mais avançada. Os pacientes MSI+ tinham idade mais elevada, o que pode ter afetado o prognóstico inicial. Entretanto, os casos MSI+ com CMT alta se distinguem do resultado da coorte total e apresentaram o prognóstico mais favorável. Dessa forma pudemos aprofundar a compreensão dos AdGs EBV e MSI, contribuir para o detalhamento molecular desta população no Brasil

ABSTRACT

The accurate determination of tumor prognosis still challenges cancer treatment. Studies have suggested that two of the molecular subtypes of gastric adenocarcinomas (GaCs) may have a better prognosis when compared to the others those characterized by the presence of the Epstein-Barr virus (GaC-EBV) and those with DNA microsatellite instability (GaC-MSI). In Brazil, the distribution of these subtypes has not been thoroughly investigated, and we do not know their prognostic impact on our population, which has its own ethnic and epidemiological aspects. This study aims to determine the prevalence and clinical/prognostic relevance of the EBV and MSI subtypes in a cohort of patients with GaC treated at the A.C.Camargo Cancer Center. The cohort includes 198 patients recruited between 2016 and 2020, from whom tumor biopsies (195/198) and gastric fluid samples (167/198) were collected. The presence of EBV DNA was assessed by qPCR and MSI status was determined from exome sequencing data from tumor samples (MSIseq/NGS classifier). In the prognostic evaluation, we used survival analysis by the Kaplan-Meier and Log Rank method (R v. 4.1.2). For statistical analyses, we used Chisquare and Fisher's exact tests (SPSS v. 25). The prevalence observed in the cohort for EBV+ and MSI+ was the same 7.1% (14/198 cases), similar to other reports in the literature. The mean age for EBV+ patients was 60 years and for EBV-, 61.7 years, and the predominant sex for both groups was male (85.7% for EBV+ and 60.3% for EBV-). As for the MSI+ cases, the mean age was 74.3 years and the majority were female (71.4%), while the MSI- patients had a mean age of 60.6 years and the male gender was prevalent (64.7%). The Lauren's subtypes distribution of EBV+ and MSI+ cases were respectively, 28.6 and 69.2% for intestinal, 57.1 and 15.4% for diffuse, and 14.3 and 15.4% for the subtype mixed. We observed a significant relationship between this classification and MSI status (p=0.017), but not for the presence of EBV. The prognostic impact was assessed by overall survival and recurrence-free survival at 05 years in the following conditions (A) excluding metastatic cases at diagnosis and (B) also excluding those with TNM stage IV. We did not observe statistical differences between the groups, which may be an effect of a limited cohort. However, EBV+ cases did not show disease recurrence, suggesting a preliminary positive impact of the presence of EBV in protecting against recurrences in GaC. In addition, we evaluated the relationship between genomic ancestry and the GaCs EBV and MSI, where the main predominant ancestry was European, followed by Asian. And we did not observe an effect of ancestry on the prognostic panorama of the subtypes. In addition, tumor mutation burden (TMB) and mutational signatures were evaluated to complement the molecular profile. There is an association highlighted for MSI+ status with the signatures corresponding to MMR deficiency and older age. This age factor was verified and the MSI+ patients were older, which affected the initial prognosis. However, MSI+ cases with high TMB differ from the result of the total cohort and presented the most favorable prognosis. In this way, we were able to deepen the understanding of GaCs EBV and MSI in order to contribute to their management in Brazil