Proceedings to avoid contaminants during isolation and storage of standard fungal strains / Processos de eliminação de contaminantes microbianos durante o isolamento e a manutenção de linhagens fúngicas de referência

ABSTRACT

The fungal strains for scientific purposes are isolated from environments, where interaction of extensive taxonomical groups is a common phenomenon, requiring development of a method that assures elimination of microbial interference and preserves original characteristic of strains. In this study, using Fusarium strains isolated from corn and animal food, the interference of antibiotic resistant bacteria and yeast contamination in the fungal strains storage was evaluated. Although frequent contamination by tetracycline, streptomycine and chloramphenicol resistant microorganisms was detected in both corn and animal food, tetracycline showed the best antibacterial effect. Following 6 months storage at 4ºC, 36 cultures of 168 single spored Fusarium strains developed atypical colonies, indicating some contamination. By plating these cultures in BDA medium added with antibiotic, 21 strains were purified, but the technique was unable to reisolate the remaining ones. The purity of these 15 strains was recuperated using dilution/plate technique proposed here, which used combination of dilution process followed by plating in BDA medium surface. The procedure is recommended as the final step for fungal strains recuperation, which allows elimination of fast growing undesirable organisms

RESUMO

Linhagens fúngicas destinadas a pesquisa científica são provenientes de material orgânico, onde ocorre intensa interação entre os mais variados grupos taxonômicos de microrganismos. O desenvolvimento de uma metodologia capaz de remover totalmente esses contaminantes indesejáveis é fundamental para garantir a característica original da linhagem em estudo. Empregando-se isolados de Fusarium spp., obtidos de milho e rações animais, analisou-se a interferência de bactérias resistentes a antibióticos e leveduras na manutenção de linhagens fúngicas. O ensaio demonstrou contaminação freqüente de microrganismos resistentes a tetraciclina, estreptomicina e cloranfenicol na microbiota natural de milho e de rações animais. O melhor controle dos interferentes foi obtido com tetraciclina, segundo avaliação por replica-plate e crescimento em meio líquido. Na análise de 168 linhagens de Fusarium spp. mantidos por seis meses a 4ºC, 36 cepas apresentaram contaminantes. A técnica de esgotamento em BDA mais antibiótico repurificou 21 cepas. As 15 cepas restantes só foram repurificadas pela técnica de diluição/plaqueamento, desenvolvida neste trabalho e recomendada para ser utilizada como último recurso na recuperação de linhagens de referências contaminadas