Detecção do vírus da artrite encefalite caprina em amostras de leite de cabras pela reação em cadeia da polimerase (PCR) e nested-PCR / Caprine arthritis encephalitis virus detected by PCR and nested-PCR in milk

RESUMO

A artrite encefalite caprina (CAE) é uma doença infecciosa multissistêmica causada por um Lentivirus, que pode infectar animais de idade e sexo variados. Os principais sinais clínicos são leucoencefalomielite, pneumonia intersticial crônica, artrite e mastite indurativa intersticial. Foi descrito que cabras infectadas apresentavam endurecimento gradativo e difuso do parênquima glandular e com a presença de vários nódulos de consistência dura, além de apresentarem diminuição na produção leiteira e alterações físico-químicas no leite. O exame de amostras de leite pelas técnicas de PCR e nested-PCR para detecção da CAE é caracterizada como métodos com alta especificidade e sensibilidade, oferecendo resultados rápidos. A técnica possibilita identificar vírus em amostras com virus não viável. Nesse estudo, 72 amostras de leite de cabras sororreagentes ao teste de imunodifusão em ágar gel (IDGA) foram avaliadas. Utilizou-se para a produção de DNA primers específicos o gene Pol. As técnicas de PCR e nested-PCR foram conduzidas para amplificar fragmentos genômicos correspondentes ao gene Pol. Catorze amostras (19,4%) apresentaram formação de banda positiva na altura de 600 pb para PCR, e 16 amostras (22,2%) para nested-PCR na altura de 278 pb. Os resultados mostraram que a técnica foi adequada para detectar o DNA pró-viral em amostras de leite e pode ser utilizado como uma ferramenta complementar no estudo da transmissão natural do vírus pela ingestão do leite de cabras sororreagentes a CAE.

ABSTRACT

The caprine arthritis encephalitis is a multisystemic infectious disease caused by a Lentivirus may affect animals at all ages and sex. The major symptoms are leukoencephalomyelitis, cronical interstitial pneumonia, arthritis and hardening interstitial mastitis. It was described that mammary glands from infected goats had a gradual non inflammatory diffuse nodular hardening, and also decreased milk production and abnormal physical-chemical milk parameters. The detection on milk samples by PCR and nested-PCR techniques are characterized as methods with high specificity and sensibility that provides fast results. The techniques are able to identify nucleic acids on samples with no living virus. In this study, 72 milk samples from infected and seroreagent to IDAG test animals were evaluated. DNA generation with specifics primers Pol gene, PCR and nested-PCR was conducted for individual amplification from a genomic fragment corresponding to the Pol gene. Fourteen samples (19, 4%) presented positive by PCR at 600 bp length bands and 16 samples (22, 2%) by nested-PCR at 278 bp length bands. The results show that PCR and nested-PCR tecniques were able to detect pro-viral DNA in goat milk samples and may be used as a complementary means of Caprine Arthritis and Encephalitis diagnosis.