Isolamento mecânico de folículos ovarianos pré-antrais em cabras

ABSTRACT

For mechanical isolation of caprine preantral follicles, ovaries from 52 undefinined breed type goats were collected at a local slaughterhouse or cirurgically extracted. The method used for preantral follicle isolation was a direct mechanical procedure (DMP). Briefly, ovaries were cut into small fragments using a tissue chopper adjusted to 500mum. The ovarian fragments were suspended 80 times with a pasteur pipette and then, the suspension was filtered successively through 500 and 100mum nylon mesh filters. The DMP resulted in a large number of isolated preantral follicles. On average, 1,067 ± 160 (mean number ± SEM) preantral follicles were isolated per ovary. To increase the number of preantral follicles recovered per ovary, the ovarian fragments remaining in the 500 and 100mum nylon mesh filters were transferred to the tissue chopper, and the procedure was repeated (complementary mechanical procedure - CMP). The use of CM P resulted in a mean increment of 5.2% of the total preantral follicles isolated per ovary. The mean number (mean ± SEM) of follicles isolated per ovary using the mechanical procedure (DPM + CPM) was 1,126 + 163. Irrespective of the procedure used, the number of preantral follicles isolated was characterized by extreme individual variation. The limits minimum and maximum of this variation were 53 and 7,482, respectively. The diameter of follicles isolated showed a range from l5.0mum to 92.7 mum. In conclusion, these results showed, for the first time, that preantral follicles can be successfully isolated from caprine ovary by applying a mechanical procedure.

RESUMO

Com o objetivo de isolar mecanicamente folículos pré-antrais caprinos, 52 ovários de cabras sem raça definida (SRD) foram coletados em matadouros ou extraídos por ovariectomia. O protocolo utilizado para o isolamento dos folículos, denominado procedimento mecânico direto (PMD), consistiu no corte do tecido ovariano em pequenos fragmentos, utilizando-se um cortador de tecidos. Em seguida, os fragmentos obtidos foram dissociados mecanicamente com pipetas de pasteur (1600mim e 600mim de diâmetro) e a suspensão resultante, contendo os fragmentos ovarianos, foi sucessivamente filtrada em malhas de náilon (500mim e 100mim). A realização deste procedimento permitiu isolar um número médio (± EP) de 1.067 ± 160 folículos por ovário. Com a finalidade de aumentar o número de folículos pré-antrais isolados por ovário, foi utilizado um procedimento mecânico complementar (PMC), que consistiu em submeter os fragmentos retidos nas malhas de 500mim e 100mim às etapas descritas no PMD. A utilização desses fragmentos resultou em um incremento médio de 5,2% no total de folículos isolados por ovário. O número médio (± EP) de folículos isolados por ovário, utilizando-se o procedimento mecânico (PMD + PMC), foi 1.126 + 163. Independentemente do procedimento utilizado, observou-se uma grande variação individual no número de folículos isolados por ovário. Os limites mínimo e máximo desta variação foram 53 e 7.482 folículos, respectivamente. O tamanho dos folículos isolados variou de 15,0mim a 92,7mim. É viável a utilização do procedimento mecânico, descrito pela primeira vez, para o isolamento de folículos ovarianos pré-antrais caprinos.