Non-radiometric immunoassays [fluoroimmunoassay (fia) and fluorometric enzyme immunoassay (feia)] with radioimmunoassay (ria) for evaluation of adrenal function in normal and hypercortisolemic dogs

ABSTRACT

Non-radiometric immunoassays offer many advantages over radiometric assays, such as higher stability of kit compounds and absence of potential hazardous effects for users and environment. The comparison of cortisol measurements by fluoroimmunoassay (FIA) and fluorometric enzyme immunoassay (FEIA) with radioimmunoassay (RIA) in adrenal function evaluation of normal (n=50) and hypercortisolemic dogs (n=12) was proposed. Serum concentrations of cortisol were measured in basal conditions and 8 hours after dexamethasone (DEX) suppression (0.01mg/kg/IV). All our reference values were based on the 5th and 95th percentile. The values for basal cortisol of healthy dogs were 0.20 to 2.35mug/d img SRC="http/img/fbpe/cr/v32n2/a12img01.gif"> for FIA, 0.30 to 5.39mug/d img SRC="http/img/fbpe/cr/v32n2/a12img01.gif"> for FEIA, and 0.65 to 4.64mug/d img SRC="http/img/fbpe/cr/v32n2/a12img01.gif"> for RIA. After DEX suppression the values were 0.87mug/d img SRC="http/img/fbpe/cr/v32n2/a12img01.gif">, 0.30mug/d img SRC="http/img/fbpe/cr/v32n2/a12img01.gif"> and 0.80mug/d img SRC="http/img/fbpe/cr/v32n2/a12img01.gif"> for FIA, FEIA and RIA, respectively. In hypercortisolemic dogs, the values of cortisol (mean ± SD) in basal and post-DEX conditions were 2.71 + 0.41mug/d img SRC="http/img/fbpe/cr/v32n2/a12img01.gif"> and 1.73 + 1.15mug/d img SRC="http/img/fbpe/cr/v32n2/a12img01.gif"> for FIA, 7.05 + 2.85mug/d img SRC="http/img/fbpe/cr/v32n2/a12img01.gif"> and 4.93 + 2.26mug/d img SRC="http/img/fbpe/cr/v32n2/a12img01.gif"> for FEIA, and 4.80 + 1.43mug/d img SRC="http/img/fbpe/cr/v32n2/a12img01.gif"> and 3.52 + 1.08mug/d img SRC="http/img/fbpe/cr/v32n2/a12img01.gif"> for RIA. Statistically significant differences (p 0.05) between the normal and the hypercortisolemic groups (Kruskal-Wallis test) were observed in the three methods, and between basal and post-DEX values (Wilcoxon test) using RIA and FEIA methods but not with FIA. Cortisol determinations by FEIA and RIA methods at DEX suppression test showed 100% of sensitivity and specificity for the diagnosis of hyperadrenocorticism in dogs. The results demonstrate that serum cortisol concentrations measurements by FEIA is a suitable alternative to the traditional RIA method for adrenal function evaluation in dogs.

RESUMO

Os métodos de dosagem hormonal por técnicas não-radioativas apresentam inúmeras vantagens sobre os que utilizam radioisótopos como marcadores de hormônios ou anticorpos. Dentre tais vantagens, incluem-se maior meia-vida útil dos reagentes por maior estabilidade dos compenentes, inexistência de riscos de contaminação radioativa, tanto pessoal quanto ambiental. Para avaliar a aplicação destes novos métodos na prática da endocrinologia clínica de pequenos animais, comparamos o método de radioimunoensaio (RIE) aos métodos alternativos fluoroimunoensaio (FIE) e enzimaimunoensaio (EIE) na avaliação da função adrenal canina. Para tanto, padronizaram-se os níveis de cortisol em cães normais (n=50) e em cães com hiperadrenocorticismo (n=12), sob condições basais e oito horas após supressão com dexametasona (DEX) (0,01mg/kg IV). Os valores do grupo de animais controle compreendidos entre os percentis 5 a 95 foram estabelecidos como normais. Os valores de cortisol basal foram de 0,20 a 2,35mig/d img SRC="http/img/fbpe/cr/v32n2/a12img01.gif"> para FIE, 0,65 a 4,64mig/d img SRC="http/img/fbpe/cr/v32n2/a12img01.gif"> para RIE e de 0,30 a 5,39mig/d img SRC="http/img/fbpe/cr/v32n2/a12img01.gif"> para EIE. Após supressão com DEX, os valores do grupo controle foram 0,87mig/d img SRC="http/img/fbpe/cr/v32n2/a12img01.gif"> para FIE, 0,80mig/d img SRC="http/img/fbpe/cr/v32n2/a12img01.gif"> para RIE e 0,30mig/d img SRC="http/img/fbpe/cr/v32n2/a12img01.gif"> para EIE. Nos cães com hipercortisolismo, os valores de média e desvio padrão dos níveis de cortisol em condições basais e pós-supressão com DEX foram de 2,71 ± 0,41mig/d img SRC="http/img/fbpe/cr/v32n2/a12img01.gif"> e 1,73 ± 1,15mig/d img SRC="http/img/fbpe/cr/v32n2/a12img01.gif"> (FIE), 7,05 ± 2,85mig/d img SRC="http/img/fbpe/cr/v32n2/a12img01.gif"> e 4,93 ± 2,26mig/d img SRC="http/img/fbpe/cr/v32n2/a12img01.gif"> (EIE), e 4,80 ± 1,43mig/d img SRC="http/img/fbpe/cr/v32n2/a12img01.gif"> e 3,52 ± 1,08mig/d img SRC="http/img/fbpe/cr/v32n2/a12img01.gif"> (RIE), respectivamente. Os resultados obtidos pelos três métodos (RIE, FIE, EIE) foram comparados, de forma a se averiguar a sua confiabilidade para o diagnóstico do hiperadrenocorticismo endógeno, no que tange às suas características de sensibilidade e especificidade. Desta forma, na avaliação da função adrenal, os métodos de EIE e RIE apresentam desempenhos semelhantes, considerados ideais (ambos com 100% de sensibilidade e especificidade). Concluiu-se que o método de EIE, para avaliação da função adrenal, mostrou-se tão adequado quanto o tradicional método de RIE para as determinações de cortisol.