Molecular characterization of Cryptosporidium in calves from rural settlements in the Northwest region of the state of São Paulo, Brazil / Caracterização molecular de Cryptosporidium em bezerros de assentamentos rurais da região Noroeste do estado de São Paulo, Brasil

ABSTRACT

The study was conducted on 25 properties of the settlements São José I and Salvador, located in the municipalities of Brejo Alegre and Birigui, in the State of São Paulo, Brazil. A record of variables was elaborated and included data such as gender, breed and age of the animals. A total of 231 stool samples were collected from bovines aged one to six months, 128 being females and 103 males, 131 crossbred and 100 Holstein. Among the 231 samples, 17 (7.36%) were positive for Cryptosporidium spp. both by malachite green negative staining and by nested-PCR. Of the 17 positive samples, 14 were sequenced in agarose gel. These sequences were detected between 99% and 100% of genetic similarity for the following species. One sequence was similar to C. parvum (AB513880.1), one to C. bovis (MF074602.1), two to C. ryanae (KT922233.1), one to C. felis (KM977642.1) and nine were similar for C. andersoni reference MF350628. C. andersoni was found in animals aged 26 months, an age group which is different from those described by several authors. The presence of C. parvum indicates that the calves in the studied region should be considered a potential source for zoonotic transmission. For the first time to our knowledge, C. felis was identified in cattle in America.

RESUMO

O estudo foi realizado num total de 25 propriedades localizadas nos assentamentos São José I e Salvador, situados nos municípios de Brejo Alegre e Birigui, no estado de São Paulo. Um registro de variáveis foi elaborado, incluindo dados como sexo, raça e idade dos animais. Foram colhidas 231 amostras de fezes de bovinos de um a seis meses de idade, sendo 128 fêmeas e 103 machos, 131 mestiços e 100 da raça Holandesa. Entre os 231 bovinos examinados, 17 (7,36%) foram positivos para Cryptosporidium spp. tanto pela coloração negativa de verde malaquita como pela nested-PCR. Das 17 amostras positivas, 14 apresentaram amplificação pela eletroforese em gel de agarose suficiente para fazer o sequenciamento de DNA. Essas sequências foram detectadas similaridade genética entre 99% e 100% com as seguintes espécies. Uma sequência foi semelhante com C. parvum (referência AB513880.1), uma com C. bovis (MF074602.1), duas com C. ryanae (KT922233.1), uma com C. felis (KM977642.1) e nove foram semelhantes com C. andersoni (MF350628). O estudo caracteriza a presença do Cryptosporidium spp. em bovinos oriundos de propriedades produtoras de leite na região Noroeste do estado de São Paulo, sendo o C. andersoni a espécie mais prevalente nesses animais, principalmente em uma faixa etária diferente das descritas por diversos autores. A presença de C. parvum indica que os bezerros da região estudada devem ser considerados como uma fonte potencial de oocistos de espécies zoonóticas. Identificamos com ineditismo o C. felis em bovinos na América, o que corrobora outros estudos realizados na Polônia e Espanha e evidencia a presença de espécies de Cryptosporidium em fezes em hospedeiros não naturais.