Estudo do mecanismo de ação do composto LQB-118 e do papel do miR-210 na radiorresistência e na classificação dos astrocitomas / [Study of the mechanism of action of the compound LQB-118 and the role of miR-210 in radioresistance and in the classification of astrocytomas]

RESUMO

O glioblastoma (GB) é um astrocitoma agressivo e letal e os pacientes possuem uma sobrevida média de 14 meses. O tratamento baseia-se em cirurgia seguida por radioterapia equimioterapia com temozolamida (TMZ). As altas taxas de recidiva e progressão tumoral estão relacionadas à resistência ao tratamento. O desenvolvimento de novas terapias mais efetivas é extremamente importante. O objetivo desse estudo foi analisar o papel do miR-210 na resposta ao novo composto sintético LQB-118 e na radiorresistência, in vitro, e naclassificação dos astrocitomas. Para tal, a atividade antitumoral de quatro novos compostos sintéticos, LQB-118, LQB-223, LQB-266 e LQB-268 foi avaliada por MTT na linhagem derivada de GB, U251-MG. O LQB-118 apresentou maior redução da viabilidade celular, sendo comparado a TMZ em outras linhagens celulares de GB, A172 e T98G, causandoefeitos similares ao observado na linhagem U251-MG. O LQB-118 induziu perda de adesão e morte celular avaliada por exclusão por azul de tripan, pela marcação de anexina V/PI por citometria de fluxo e pela redução da expressão pró-caspase-7 por Western blotting. A TMZ não induziu morte celular, demostrando a superioridade do tratamento com o LQB-118. Este composto reduziu os níveis proteicos de ERK e AKT e aumentou a expressão do miR-210,enquanto a TMZ reduziu a fosforilação de ERK de forma menos intensa, sugerindo regulação da expressão gênica pelo composto...

ABSTRACT

Glioblastoma (GB) is the most common astrocytoma and one of the most aggressive and lethal human malignancies. Patients present a median survival of 14 months. Surgeryfollowed by radiotherapy and chemotherapy with temozolomide (TMZ) are the first line treatment. Recurrence and tumor progression are related to treatment resistance and occurs in the majority of cases. Thus, development of more effective therapies becomes essential. Theaim of this study was to understand the role of miR-210 in response to treatment with new synthetic compound, LQB-118, and to ionizing radiation, in vitro. Furthermore, evaluate miR-210 importance in astrocitomas’ classification. To this end, U251-MG cell line was used to analyze the antitumoral activity of new synthetic compounds (LQB-118, LQB-223, LQB-266 and LQB-268) by MTT. LQB-118 demonstrated the highest effect on cell viability and itseffect was further evaluated in two more cell lines (T98G and A172) in comparison to TMZ. These cells demonstrated results similar to U251-MG cells. LQB-118 induced cell detachment and cell death assessed by trypan blue exclusion assay, by induction of annexin V labeling and reduction of pro-caspase-7 levels by flow cytometry and Western blotting,respectively. Moreover, TMZ did not significantly induce cell death, pointing out the superiority of LQB-118. In front of this, LQB-118 effect was evaluated in cell survival pathways AKT, ERK and microRNAs expression miR-7, miR-143 and miR-210. LQB-118 reduced ERK1/2 and AKT expression, and enhanced miR-210 expression, suggesting geneexpression regulation by the compound. TMZ only slightly reduced ERK1/2 phosphorylation. As microRNAs are regulators of gene expression and miR-210 has a controversial role in literature, understanding its role in GB...