Caracterización molecular de pacientes con deficiencia de 21-hidroxilasa en Argentina / Molecular characterization of patients with 21-hydroxylase deficiency in Argentina

RESUMEN

INTRODUCCION: La hiperplasia suprarrenal congénita se caracteriza por la disminución en la síntesis de cortisol por la glándula adrenal. El 95% de los casos se debe a la deficiencia en la enzima 21-hidroxilasa. La enzima es codificada por el gen CYP21A2, ubicado dentro del módulo RCCX; su expresión está modulada por dos regiones río arriba del gen.OBJETIVO: Obtener la caracterización molecular de la región RCCX y estudiar posibles variaciones de secuencia en las dos regiones regulatorias distales de la transcripción del gen, en pacientes de Argentina.METODOS: La caracterización molecular de la región RCCX se llevó a cabo mediante la técnica de Southern Blot, usando las restricciones con las enzimas Taq I y Bgl II y sondas para los genes CYP21, TNX y C4. El estudio de las regiones regulatorias de la transcripción se realizó por secuenciación automática de los fragmentos de interés.RESULTADOS: Se identificaron ocho haplotipos diferentes de la región RCCX y se encontró una variante de secuencia en cada región regulatoria estudiada.CONCLUSIONES: Las técnicas utilizadas fueron adecuadas para lograr los objetivos propuestos. La caracterización molecular de la región RCCX permitió evidenciar una elevada variabilidad en la composición génica y modular de la región. Por su parte ,los resultados de estudios de bioinformática indicarían que la variante alélica hallada en una de las regiones regulatorias podría modular la expresión del gen CYP21A2. Ambos estudios constituyes los reportes más detallados de la caracterización de ambas regiones en pacientes argentinos.

ABSTRACT

INTRODUCTION: The congenital adrenal hyperplasia is characterized by decreased synthesis of cortisol by the adrenal gland. 95% of the cases are fue to deficiency in the exime 21-hydroxylase. The enzyme is encoded by the CYP21A2 gene, located within the RCCX module; its expression is modulated by two regions upstream of the gene.OBJECTIVE: To obtain the molecular characterization of the RCCX region, where the CYP21A2 gene is located. Also, to study possible sequence variations in the two distal regulatory regions of gene transportation in patients of Argentina.METHODS: The molecular characterization of the RCCX region was done by Southern blot technique, using the restrictions with enzymes Taq I and Bgl II and probes for genes CYP21, TNX and C4. The study of transcriptional regulatory regions was performed by automatic sequencing of fragments of interest.RESULTS: Eight different haplotypes were identifies in the RCCX region, finding a sequence variant in each regulatory region studied.CONCLUSIONS: The techniques used were adequate to achieve the proposed objectives. The molecular characterization of the RCCX region showed a high variability in gene and modular composition. Moreover, results from bioinformatics studies indicate that the allelic variant found in one of the regulatory regions could modulate the expression of CYP21A2 gene. Both studies constitute the most detailed reports characterizing the two regions in Argentinean patients.