Estudo do rendimento viral na produção da vacina influenza, com base no uso de ovos de galinha embrionados com diferentes idades

ABSTRACT

This experimental study proposes to carry out a data collection regarding the viral yield of the production of the monovalent influenza virus, using embryonated chicken eggs with different ages. Considering that it is an experimental work, the main justification for its realization is the constant search for the improvement of industrial production processes, specifically, the possibility of increasing the production capacity of the factory of monovalent influenza viruses. For this, the determination of the best embryonic age will enhance a greater replication of the viral population existing in the microenvironment of the egg surrounding the embryo. All stages of the study procedures, which included the use of various modern equipment and laboratory materials, as well as specific reagents inherent to the process, were in accordance with the parameters established by the Quality Assurance department of the Butantan Institute, being in-process controls essential for the different stages of the artificial incubation stage of embryonated chicken eggs. Embryonated chicken eggs aged between 37 and 44 weeks, strains B/Phuket/3073/2013, B/Austria/1359417/2021, A/Darwin/9/2021, respectively, were used, totaling 9,000 (nine thousand) eggs with 9 (nine), 10 (ten), 11 (eleven) and 12 (twelve) day-old embryos for interpretation of the respective statistical data. The study was carried out in the Laboratory for the Production of Influenza Banks (PBI) building, since it was in compliance with regard to the nature of the laboratory activities monitored by the Institution's support disciplines, as well as being in line with the Good Laboratory Practices, Good Manufacturing Practices and Good Biosafety Practices. The eggs were incubated in specific artificial incubation machines and subjected to a temperature range between 33°C and 35°C, as well as a humidity of approximately 55%, which were the in-process controls chosen for effective viral replication and subjected to following unit operations receipt of eggs, primary candling, primary incubation, preparation of viral inoculum, test of hemagglutinating units of viral inoculum, viral inoculation, secondary incubation, secondary candling, primary cooling, collection of Allantoic Liquid, secondary cooling, sample purification , determination of sucrose content, UHA and Optical Density of 14 purified samples. The results of this experimental study were submitted to statistical analysis to enhance discussions about the implementation of the use of embryonated chicken eggs, with 11 days and/or 12 days of life, better viral yields found, as strategies to establish new specifications of embryonated eggs, as raw material for the production process.

RESUMO

Este estudo experimental propõe a realização de um levantamento de dados no tocante ao rendimento viral da produção do monovalente do vírus influenza, utilizando ovos de galinha embrionados e com diferentes idades. Considerando que é um trabalho experimental, a principal justificativa para sua realização é pela constante busca do aperfeiçoamento dos processos produtivos industriais, especificamente, na possibilidade de aumentar a capacidade produtiva da fábrica de monovalentes de vírus influenza. Para isto, a determinação da melhor idade embrionária potencializará uma maior replicação da população viral existente no microambiente do ovo circundante ao embrião. Todas as etapas dos procedimentos do estudo, que contou com a utilização de diversos equipamentos modernos e materiais laboratoriais, bem como reagentes específicos inerentes ao processo, estavam em conformidade com os parâmetros estabelecidos pelo departamento de Garantia da Qualidade do Instituto Butantan, sendo controles em processo essenciais para os diferentes estágios da etapa de incubação artificial dos ovos de galinha embrionados. Foram utilizados ovos embrionados de galinha com idades entre 37 e 44 semanas, das cepas B/Phuket/3073/2013, B/Austria/1359417/2021, A/Darwin/9/2021, respectivamente, totalizando 9.000 (nove mil) ovos com embriões de 9 (nove), 10 (dez), 11 (onze) e 12 (doze) dias de idade para interpretação dos respectivos dados estatísticos. O estudo foi realizado no prédio do Laboratório da Produção de Bancos Influenza (PBI), uma vez que estava dentro da conformidade no tocante a natureza das atividades de cunho laboratorial acompanhadas pelas disciplinas de apoio da Instituição, assim como mantinham-se em consonância com as Boas Práticas de Laboratório, Boas Práticas de Fabricação e Boas Práticas de Biossegurança. Os ovos foram incubados em máquinas específicas de incubação artificial e submetidos ao range de temperatura compreendido entre 33°C e 35°C, bem como a umidade de aproximadamente 55%, que foram os controles em processo escolhidos para a efetiva replicação viral e submetidos às seguintes operações unitárias recebimento dos ovos, ovoscopia primária, incubação primária, preparo do inóculo viral, teste de unidades 12 hemaglutinantes do inóculo viral, inoculação viral, incubação secundária, ovoscopia secundária, resfriamento primário, colheita do Líquido Alantóico, resfriamento secundário, purificação das amostras, determinação do teor de sacarose, UHA e Densidade Óptica das amostras purificadas. Os resultados deste estudo experimental foram submetidos a análises estatísticas para potencializar as discussões sobre a implementação do uso de ovos de galinha embrionados, com 11 dias e/ou 12 dias de vida, melhores rendimentos virais encontrados, como estratégias para estabelecer novas especificações dos ovos embrionados, na condição de matéria prima para o processo produtivo.