Efeito da Cotoxina na Sinalização Intracelular Envolvida na Fagositose por Neutrófilos

RESUMO

A Crotoxina (CTX), principal constituinte do veneno de Crotalus durissus terrificus (VCdt), tem ação anti-inflamatória prolongada, modulando funções de macrófagos e neutrófilos. Estados anteriores demonstraram que uma única administração dessa toxina inibe, por até 14 dias, a atividade fagocítica de neutrófilos obtidos no modelo de peritonite induzido por carragenina. Considerando a rápida metaboização da CTX e a vida média curta dos neutrófilos, é dificil explicar a ação prolongada dessa toxina. Nesse sentido, o objetivo do estudo é avaliar o efeito da CTX in vidro e in vivo sobre a funcionalidade de neutrófilos da medula óssea de camundongos, bem como sobre os mecanismos moleculares envolvidos nas funções avaliadas. Para os ensaios in vitro, os netrófilos foram incubados com a CTx (0,08 ug/mL), por 1 dia ou 24 horas. Para os ensaios in vivo, os animais foram pré-tratados com uma única administração de CTX (4mg/kg), 1 dia antes do isolamento das células. Após os tratamentos acima, os seguintes parâmetros funcionais foram avaliados a) fagocitose de partículas de zimosan opsonizadas com C3bi e b) expressão das molécuilas sinalizadoras envolvidas no processo de fagocitose. Os resultados aqui apresentados mostraram que a CTX, in vitro e in vivo, inibiu o processo de fagocitose de partículas opsonizadas, bem como, a atividade de Syk, Vav1, Cdc42, Racl e RhoA e a expressão da subunidade 1B do complexo Arp 2/3. Em conjunto, os resultados obtidos mostraram que a CTX inibe a atividade funcional dos neutrófilos da medula óssea e essa ação está associada a inibição da atividade de proteínas sinalizadoras de Syk e de suas proteínas dowstream o que resulta da redução da formação de filamentos de F-actina. Dessa forma, esse estudo comprova a hipótese de que a ação inibitória prolongada da CTX sobre os neutrófilos circulantes e peritoneais está associada as alterações funcionais dos neutrófilos da medula. Esses dados contribuem para explicar o efeito inibitório da CTX sobre a respota inflamatória, particularmente sobre os eventos celulares dessa resposta.