Aplicación de la técnica de inmunoperoxidasa para la / titulación de cepas del virus Dengue 1 / Use of the immunoperoxidase technique for the titration of a Dengue 1 virus strain

ABSTRACT

La aplicación de la técnica de inmunoperoxidasa para titular virus Dengue ha permitido eliminar algunas de lasdesventajas que presenta, para este mismo fin, la técnica de formación de placas en cultivos celulares,catalogada como un método fastidioso debido a los múltiples factores que influyen en la formación de las placas. En la literatura consultada se reporta la disminución del tiempo para la obtención de los resultados como la principal ventaja de la primera, pero no datos sobre su precisión. Teniendo esto en cuenta nos propusimos aplicar dicha técnica para titular virus Dengue 1. Se siguió el procedimiento descrito para realizar la inmunoperoxidasa modificando el tiempo de fijación de las células infectadas de 5, 7 y 10 días y el bloqueo con TSF-Tween 20- SAB 1(por ciento) durante una hora. La dilución de trabajo para el suero humano utilizado fue de 1/500 y para el líquido ascítico hiperinmune de ratón, contra Dengue 1 fue de 1/100; para los conjugados peroxidasa anti humano y anti ratón empleados, resultaron útiles diluciones de 1/100 y 1/200 para el primero y 1/500 y 1/1000 para el segundo. Se evidenciaron los focos de infección viral, al 7° y 10° días, pero no al 5º. Los títulos virales obtenidos por dos operadores presentaron un Coeficiente de Variación < 30(por ciento). Se seleccionó el 7º día para titular el virus, lográndose reducir el tiempo requerido para obtener los resultados con la técnica de placas.No hubo diferencias significativas entre los títulos virales calculados por ambas técnicas(AU)