Producción de factor básico de crecimiento de fibroblastos (Beta-fgf) trasla estimulación de fibroblastos pulmonares humanos in vitro confactor transformador del crecimiento Beta1 (tGf-Beta1). Estudio dosis respuesta / The production of basic fibroblast growth factor following in vitro stimulation of human lung fibroblasts with transforming growth factor Beta1: Dose response Study

RESUMEN

Objetivo: Establecer cuál es la dosis de TGF-β1 más adecuada para la estimulación de cultivos de fibroblastos pulmonares humanos y el tiempo necesario de incubación de los mismos para obtener la máxima respuesta. Material y métodos: Diseñamos un estudio de dosis respuesta con TGF-β1 sobre una línea celular de fibroblastos pulmonares humanos. Analizamos la producción de factor básico de crecimiento de fibroblastos (b-FGF) como marcador de estímulo fibrogénico. Para ello se cultivaron fibroblastos humanos procedentes de una línea celular (MRC5) obtenida de la ECCC (European Collection of Cell Culture, UK). Las células se cultivaron en placas de 33cm2, cuando estuvieron confluentes se les estimuló con diferentes dosis de TGF-β1 (Peprotech, USA) 5, 10 ng/ml. Las células se incubaron durante 12, 24, 48 y 72 horas. Se usaron como control células no estimuladas con TGF-β1. Los niveles de factor básico de crecimiento de fibroblastos (b-FGF) se midieron por ELISA (R&D System, Minneapolis, MN). Se analizó la viabilidad celular mediante Azul Trypan a las 24, 48 y 72 horas de la estimulación con TGF-β1. Resultados: La mayor producción de b-FGF se produjo a las 24 horas tras la estimulación con la dosis de 10 ng/ml de TGF-β1, siendo la producción de b-FGF igual a 501 pg/ml. La viabilidad celular tiene su mayor valor a las 48 horas, disminuyendo en horas sucesivas, alcanzando los niveles más bajos a las 72 horas. Conclusiones: Existe un efecto estimulador del TGF-β1 sobre los fibroblastos pulmonares humanos in vitro. Esta acción del TGF-β1 es dosis dependiente y alcanza el nivel máximo de proliferación con la dosis de 10 ng/ml a las 24 horas de su tratamiento (AU)

ABSTRACT

Objective: To establish the most appropriate dose of TGF-β1 to stimulate human lung fibroblasts cultures and their necessary incubation time to obtain the maximum response. Material and methods: A dose response study was designed with TGF - β1 based on human lung fibroblast cells. The production of basic fibroblast growth factor (b-FGF) was analyzed as a marker for fibrogenic stimulus. Human fibroblasts from a cell line (MRC5) were obtained from the ECCC (European Collection of Cell Culture, UK) and cultivated. Cells were cultured on 33 cm2 plates; once confluent, they were stimulated with various doses of TGF - β1 (Peprotech, USA) 5, 10 ng/ml. The cells were incubated for 12, 24, 48 and 72 hours. Cells not stimulated with TGF - β1 were used as a control. The levels of basic fibroblast growth factor (b-FGF) were measured using ELISA (R&D System, Minneapolis, MN). Cell viability was analyzed using Trypan Blue at 24, 48 and 72 hours following the stimulation with TGF - β1. Results: The greatest production of b-FGF took place 24 hours after the stimulation with the dose of 10ng/ml of TGF - β1, with the production of b-FGF being equal to 501 pg/ml. The cell viability reached its greatest value at the 48 hours, decreasing in the hours thereafter, to reach the lowest levels at 72 hours. Conclusions: TGF-β1 has a stimulating effect on human lugn fibroblasts in vitro. This action of the TGF - β1 is dose dependent and reaches maximum proliferation levels with a dose of 10ng/ml 24 hours following treatment (AU)