Estudio del riesgo cardiovascular en pacientes con bloqueo del sistema renina-angiotensina a través del proteoma de las vesículas extracelulares circulantes / Cardiovascular risk study in patients with renin-angiotensin system blockade by means of the proteone of circulating extracellular vesicles

RESUMEN

Introducción: Las vesículas extracelulares (EV) son liberadas al torrente circulatorio por determinados tipos celulares a consecuencia de procesos de transporte, activación o muerte celular. El recuento de EV circulantes de origen plaquetario y endotelial ha demostrado tener un importante papel como biomarcador de riesgo cardiovascular. Por lo tanto, el proteoma de estas EV podría reflejar los procesos celulares subyacentes en pacientes con hipertensión arterial y albuminuria. Material y métodos: El contenido proteico de las EV circulantes se ha analizado mediante cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masas. Las EV han sido aisladas mediante un protocolo de ultracentrifugación optimizado para evitar la contaminación de proteínas del plasma. La pureza de la fracción aislada ha sido verificada mediante microscopia electrónica y confocal, y por citometría de flujo. Resultados: En este estudio mostramos un método de gran rendimiento y pureza para obtener extractos proteicos de EV circulantes de pacientes hipertensos con/sin albuminuria para análisis proteómico. Además, aportamos el proteoma de referencia de EV de estos pacientes, compuesto por 2.463 proteínas, y demostramos que las proteínas transportadas por estas vesículas están relacionadas con procesos cruciales involucrados en el riesgo cardiovascular asociado. Conclusión: El proteoma de las EV circulantes constituye una interesante fuente de indicadores para la evaluación de procesos relacionados con el riesgo cardiovascular en pacientes hipertensos con bloqueo del sistema renina-angiotensina

ABSTRACT

Introduction: Extracellular vesicles (EVs) are released to the bloodstream by certain cell types due to transport, activation and cell death processes. Blood count of EVs from platelet and endothelial origin has been proved to be a cardiovascular risk biomarker. Thus, EVs proteome might reflect the underlying cellular processes in hypertensive patients with albuminuria. Material and methods: Protein content of circulating EVs was analyzed by liquid chromatography coupled to mass spectrometry. EVs were isolated by an ultracentrifugation protocol optimized in order to avoid contamination by blood plasma proteins. Purity of the isolated fraction was verified by electronic and confocal microscopy, and by flow cytometry. Results: We hereby show a method to isolate circulating EVs from hypertensive patients with/without albuminuria with high yield and purity. Besides, we provide a reference proteome of the EVs of these patients, composed of 2,463 proteins, and prove that the proteins carried by these vesicles are associated with crucial processes involved in the inherent cardiovascular risk. Conclusion: The proteome of circulating EVs is an interesting source of indicators in the evaluation of cardiovascular risk in hypertensive patients with renin-angiotensin system blockage