Importancia de los estudios de biología molecular en el asesoramiento genético de familias argentinas con retinoblastoma / The relevance of molecular biology studies in the genetic counselling of argentine retinoblastoma families

RESUMEN

Objetivo: Evaluar la importancia de la detección demutaciones del gen RB1 en el asesoramiento genéticode las familias argentinas con retinoblastoma.Métodos: Se incluyeron en este estudio 34 familiasargentinas con Retinoblastoma (Rb) bilateral y unilateral.Se analizaron 130 muestras de ADN de leucocitos,tumores y vellosidades coriónicas, porensayos de Biología Molecular indirectos y directos,como Southern blot, segregación de los polimorfismosBamHI, Rbi4, XbaI y Rb 1.20 (PCRRFLP,PCR-STR), PCR-heteroduplex y secuenciacióndel gen RB1.Resultados: El análisis molecular fue informativoen 18 familias de las 34 incluidas en el estudio(53%), el 56% con Rb bilateral y el 44% con Rbunilateral. Se contó con muestras de ADN tumoralde 11 pacientes que se estudiaron para detectar pérdidade heterocigosidad (LOH), que posibilitó identificarel alelo RB1 mutado en 9 pacientes (82%).Cuando no se analizaron las muestras tumorales, los estudios fueron informativos solo en 9 de los 23pacientes (39%); se utilizó la detección directa en17 pacientes (41% informativo) e indirecta en 20(60% informativo).Conclusiones: Los resultados demuestran la necesidadde contar con ADN del tumor, cuando elpaciente fue enucleado, y acentúan la importanciade la detección directa de la mutación en familiascon Rb esporádico temprano sin muestra tumoral.Los estudios de biología molecular contribuyeroncon el adecuado asesoramiento genético de pacientesargentinos y sus familiares y el diseño apropiadode su tratamiento temprano(AU)

ABSTRACT

Objective: Evaluate the relevance of RB1 mutationsdetection in the genetic counselling of Argentineretinoblastoma families.Methods: We included in this study 34 Argentinefamilies with bilateral and unilateral Retinoblastoma(Rb). 130 DNA samples from leukocytes,tumors and chorionic villus were analyzed by indirectand direct molecular biology assays like Southernblot, segregation of polymorphisms BamHI,Rbi4, XbaI y Rb 1.20 (PCR-RFLP, PCR-STR),PCR-heteroduplex and sequencing of RB1 gene.Results: Molecular biology analysis was informativein 18 out of 34 families studied (53%), 56% withbilateral and 44% with unilateral Rb. DNA tumorsamples of 11 patients were available and could bestudied by loss of heterozygosity (LOH) detection,that allowed us to identify the mutated RB1 allele in9 (82%) patients. When tumor samples were notanalized, the studies were informative only in 9 outof 23 patients (39%); we used direct mutation detection in 17 (41% informative) and indirectassays in 20 (60% informative) patients.Conclusions: The results prove the necessity tohave DNA tumor, when the patient has been enucleated,and emphasize the importance of direct mutationdetection in families with early sporadic Rbwithout tumor sample.The RB1 molecular biology contributed to the adequategenetic counselling of Argentine patients andrelatives and their appropriate early treatment planning(AU)