Site-directed mutagenesis of the foot-and-mouth disease virus RNA-polymerase gene

RESUMO

O gene da RNA-polimerase do vírus da febre aftosa foi mutagenizado dentro do seu sítio de atividade. Utilizando o cDNA da cepa viral CS8 C1 - Santa Pau, o gene foi digerido com Pst I gerando um fragmento contendo a seqüência crítica de mutagênese. Este fragmento foi subclonado em M13mp8 e quatro mutaçöes foram geradas in vitro através do método de mutagênese sítio-dirigida por oligonucleotídeo. O gene da polimerase foi entäo reconstruído e subclonado em pUC19. Estes mutantes seräo usados em estudos de estrutura e atividade da enzima e no desenvolvimento da técnica de "imunizaçäo intracelular" em células eurcariontes