Expressao do antigeno de 18kDa de Mycobacterium leorae na levedura Saccaromyces cerevisisae e estudo das propriedades imunogenicas do antigeno recombinante / Expression of the antigen of 18kDa of Mycobacterium leprae na levedura Saccharomyces cerevisiae and study of imonogenics properties of recombinant antigen

RESUMO

Dois diferentes sistemas de expressao do antigeno de 18 kDa de M. leprae (p18) em S. cerevisiae, um intracelular e outro de secrecao, foram desenvolvidos. Ambos os sistemas mostraram-se efetivos para a expressao, mas a purificacao da p18 secretada mostrou-se mais simples. Comparando diferentes cepas hospedeiras e condicoes de cultivo, foi obtido um sistema de secrecao de alto rendimento (mais de 100 mg de proteina biologicamente ativa por litro). A p18 foi purificada do meio de cultura da levedura por precipitacao, seguida de cromatografias de troca ionica e por filtracao em gel. As propriedades imunologicas da proteina recombinante, nativa ou previamente irradiada com raios 'GAMA' foram analisadas em camundongos. Ambas as preparacoes desencadearam producao de anticorpos e reacao de hipersensibilidade tardia, correspondentes as respostas humoral e celular, respectivamente. Em adicao, a irradiacao previa do antigeno potencializou sua imunogenicidade a nivel celular. Estes resultados demonstram ser esta proteina forte candidata para utilizacao em novos testes cutaneos para a monitorizacao da resposta celular contra M. leprae