Construçäo de plasmídeo recombinante próstato específico e controlador de transcriçäo, para a avaliaçäo de expressäo do gene Pten como supressor tumoral / Construction of a prostate specific recombinant plamid with overexpression control of the Pten as a tumor supressor gene

RESUMO

Inúmeras investigações estão sendo realizadas, visando à obtenção de novas modalidades terapêuticas eficientes e seguras para o tratamento do câncer da próstata. Nesse sentido, idealizamos um modelo experimental de terapia gênica que teve por objetivo a construção de um plasmídeo recombinante, para avaliar a expressão do gene supressor tumoral produtor da proteína tensina PTEN, com a transfecção em células de linhagem tumoral prostática PC3 (Prostate Cancer 3). No processo de construção do plasmídeo plRES (intern ribosome entry sites), inseriu-se o promotor probasin, que tem como característica promover a especificidade de transcrição somente em células de tecido prostático, o mecanismo de controlador de transcrição Tet on-off e um gene repórter produtor de fosfatase alcalina (SEAP). A eficácia do controle da transcrição foi demonstrada pelo aumento 30 vezes maior da produção de fosfatase alcalina em meio seletivo apropriado. Os resultados obtidos permitiram a substituição no plasmídeo do gene repórter SEAP pelo gene de interesse PTEN. Células PC3 foram transfectadas com o plasmídeo recombinante e semeadas em meios seletivos para a expressão do gene PTEN. Alterações no comportamento biológico dessas células decorrentes da expressão do PTEN foram avaliadas pela velocidade de divisão celular, pelo potencial de formação de clones in vitro e pela indução do crescimento tumoral em ratos imunodeprimidos in vivo. Células PC3 expressando PTEN, in vitro demonstraram redução de 50 por cento na velocidade de divisão celular e 25 por cento no potencial de formação de clones e in vivo revelaram redução em 50 por cento do volume quando comparadas às células PC3 selvagens. Com os resultados obtidos pudemos concluir que (1) o mecanismo Tet On-Off utilizado foi eficaz no controle de transcrição do sistema, (2) a redução da velocidade de divisão, o potencial de formação de clones e a indução do crescimento tumoral parecem indicar significante contribuição do gene PTEN na "agressividade" das células tumorais prostáticas PC3. Esses dados são consistentes com a possibilidade do gene PTEN ser supressor tumoral. Esse estudo indica que outros trabalhos na área são plenamente justificados para que em futuro próximo seja possível a aplicação de terapia gênica na prática médica