Immunoblotting analyses using two-dimensional gel electrophoresis of Trypanosoma cruzi excreted-secreted antigens

RESUMO

Formas tripomastigotas de Trypanosoma cruzi excretam/secretam uma complexa mistura de moléculas antigênicas. Essa mistura é chamada trypomastigote excreted-secreted antigens e contém uma banda de massa molecular em torno de 150-160kDa que possui excelente performance para diagnóstico de doença de Chagas em immunoblotting. No presente estudo foi caracterizado parcialmente, por gel bidimensional, a proteína de 150-160kDa pela análise da reatividade de anticorpos de pacientes chagásicos nas diversas fases da doença. Proteínas do trypomastigote excreted-secreted antigens foram separadas por eletroforese de alta resolução em duas dimensões (2D) e submetidas a immunoblotting com soros de pacientes chagásicos e não chagásicos. A proteína de 150-160kDa foi identificada em quatro isoformas com pontos isoelétricos variando entre 6,2 a 6,7. As quatro isoformas foram reconhecidas por anticorpos IgM na fase aguda e por anticorpos IgG na fase crônica da doença de Chagas. A isoforma de 150-160kDa, com ponto isoelétrico de aproximadamente 6,4 tornou-se imunodominante dentre as demais com a progressão da doença. Não foi detectada reatividade cruzada com os soros de pacientes não chagásicos ou pacientes infectados com Leishmania sp. Os dados obtidos nesse trabalho, reforçam a importância da utilização do trypomastigote excreted-secreted antigens para o diagnóstico sorológico da doença de Chagas.