Extração de DNA de materiais de arquivo e fontes escassas para utilização em reação de polimerização em cadeia (PCR) / Methods of DNA extraction from archived materials and rare sources for utilization in polymer chain reaction

RESUMO

Este trabalho visou a comparação de cinco métodos diferentes de extração de DNA de materiais de arquivo (tecidos incluídos em parafina, esfregaços de sangue periférico - corados e não corados com Leishman, lâminas com mielogramas, gotas de sangue em Guthrie Card) e de fontes escassas (células bucais, um e três bulbos capilares e 2 mL de urina), para que fossem avaliadas a facilidade de aplicação e a facilidade de amplificação deste DNA pela técnica da reação de polimerização em cadeia (PCR). Os métodos incluíram digestão por proteinase K, seguida ou não por purificação com fenol/clorofórmio; Chelex 100® (BioRad); Insta Gene® (BioRad) e fervura em água estéril. O DNA obtido foi testado para amplificação de três fragmentos gênicos Brain-derived neutrophic factor (764 pb), Factor V Leiden (220 pb) e Abelson (106 pb). De acordo com o comprimento do fragmento gênico estudado, da fonte potencial de DNA e do método de extração utilizado, os resultados caracterizaram o melhor caminho para padronização de procedimentos técnicos a serem incluídos no manual de Procedimentos Operacionais Padrão do Laboratório de Biologia Molecular do Hemocentro - HC - Unesp - Botucatu.

ABSTRACT

The present work aimed at comparing five different methods ofDNA extraction of samples from archived materials (paraffinembeddedtissues, peripheral blood smears - stained or not withLeishman, aspired bone marrow smears and Guthrie cardbloodspots) and from rare sources (oral cells, one and threecapillary bulbs, 2 mL of urine), to evaluate the ease of applicationand the possibility of amplification of this DNA by thepolymerization chain reaction (PCR) technique. The methodsincluded proteinase K digestion - followed or not by phenol/chloroform purification, Chelex 100® (BioRad), InstaGene®(BioRad) and boiling in the sterile water. The DNA obtained wastested for amplification of three genic fragments the brain-derivedneutrophic factor gene (764 bp), the Factor V Leiden gene (220bp) and the Abelson gene (106 bp). According to the gene fragmentlength studied, the DNA potential source and the extraction methodused, the results characterized the best way to standardizetechnical procedures to be included in the Standard OperationalProcedure Manual of the Molecular Biology Laboratory of theBlood Center in the Medicine School of Unesp, Botucatu, Brazil.