Atividade proteolítica relacionada à sinalização por melatonina e cálcio em Plasmodium / Proteolytic activity elicited by melatonin and calcium in Plasmodium

RESUMO

Durante o ciclo intraeritrocítico, o Plasmodium, parasita causador da malária, utiliza a proteólise em processos fundamentais do metabolismo, como invasão de novos eritrócitos, degradação da hemoglobina e escape eritrocitário dos merozoítos. Esta última fase ocorre de maneira característica em Plasmodium, quando todos os parasitas são liberados sincronicamente na corrente sangüínea, em um único evento. Tal fenômeno é desencadeado pela sinalização com a melatonina (Hotta et al., 2000), hormônio do organismo hospedeiro responsável pelo controle do ciclo circadiano em vertebrados. A sinalização por melatonina em Plasmodium ativa a fosfolipase C e libera Ca2+ para o citoplasma a partir de canais de Ca2+ sensíveis a IP3 presentes no retículo endoplasmático do parasita. Avaliamos a influência da sinalização por melatonina e compostos que aumentam o Ca2+ citoplasmático na atividade proteolítica de trofozoítos de P. chabaudi e P. falciparum, utilizando peptídeos com apagamento intramolecular da fluorescência. A permeação em parasitas isolados e intraeritrocíticos também foi avaliada a partir de microscopia confocal com peptídeos fluorescentes marcados com os fluoróforos Abz ou FITC, dentro de uma faixa de peso molecular (653-3146 Da). No presente trabalho observamos que o estímulo por Ca2+ desencadeado pelo tratamento dos parasitas com melatonina, tapsigargina, ionomicina e nigericina promovem o aumento da hidrólise de substratos peptídicos, bloqueada pelo inibidor de cisteinil-proteases E-64 e pelo quelante intracelular de Ca2+, BAPT A. A partir do tratamento dos trofozoítos com os compostos que aumentam o Ca2+ citoplasmático, pudemos marcar cisteinil-proteases neste mesmo compartimento, através da ligação irreversível com inibidor análogo ao E-64 ligado à sonda fluorescente. Em resumo, no presente trabalho demonstramos que P. falciparum e P. chabaudi apresentam atividade cisteinil-proteásica Ca2+ -dependente citoplasmática.