Aplicação da Proteína Verde Fluorescente, GFPuv, como indicador biológico na validação da autoclavação de soluções parenterais e da esterilização por óxido de etileno de itens termolábeis. Comparação com esporos de Bacillus subtilis / Use of the Green Fluorescent Protein as a biological indicator for the validation of parenteral solutions sterilization and for the ethylene oxide sterilization process of thermal labile items

RESUMO

A Proteína Verde Fluorescente recombinante, GFPuv, é um sistema marcador atrativo pois, sua presença pode ser visualizada através da intensidade de fluorescência emitida, sem o uso de substratos ou meios complexos. Sendo uma molécula estável à presença de substâncias orgânicas, temperaturas acima de 70’graus’C e ampla faixa de pH, é um potencial Indicador Biológico (IB) para diversas aplicações. A estabilidade térmica da GFPuv, foi avaliada pela medida da perda de intensidade de fluorescência, expressa em valores D (min), tempo de exposição necessário para redução de 90% da intensidade de fluorescência inicial da GFPuv. GFPuv (3,5-9,0 ‘mü’g/mL), expressa por E. coli e isolada por extração de Partição em Três Fases (TPP) e purificação por Cromatografia de Interação Hidrofóbica (HIC), foi diluída nas soluções parenterais preparadas em tampão (10 mM cada Tris-EDTA, pH8; Fosfato, pH 6 e 7, e Acetato, pH 5) e em água para injeção, WFI; pH = 6,70’+ou-‘0,40), e expostas a temperaturas de 25’graus’C e ao intervalo entre 80’graus’C e 100’graus’C. A 95’graus’C, os valores D para GFPuv em soluções de 1,5% a 50% de glicose variaram de (i) 1,63 (‘+ou-‘0,23) min em acetato pH 5; (ii) 2,64 ‘+ou’ 0,26 min em WFI; (iii) 2,50 `mais ou menos' 0,18 min em fosfato pH 6; (iv) 3,24 `mais ou menos' 0,28 min em fosfato pH 7 e, (v) 2,89 `mais ou menos' 0,44 min em Tris-EDTA ph 8...