A comparison of the immune parameters of dogs infected with visceral leishmaniasis using Western blot and neutralization techniques

ABSTRACT

The Western blot technique was used to demonstrate the presence of antibodies in the blood of dogs that presented canine visceral leishmaniasis. This technique was used against some specific molecules present in the lysate of the promastigote form of Leshmania chagasi.Through the association of the results of the Western blot technique with the morphological alterations seen as a result of the serum neutralization technique performed in McCoy cells (which mimetizes the macrophage) it was possible to observe the role of some molecules of great relevance in determining the disease in symptomatic dogs as well as that of some other molecules associated with asymptomatic infected dogs that may become transmitters as well as differentiating them as asymptomatic resistant dogs. In the sera analyses carried out during the immunobloting a variation of 9 to 27 immunoreacting bands was observed, which were then compared using Dice's similarity coefficient. In the dendrogram constructed on the basis of the coefficient, 50 percent similarity was observed among the total number of reagent bands with the promastigote lysate, thus creating five groups. The main difference observed related to the clinical condition of the dogs symptomatic and asymptomatic dogs were found in separate groups. The asymptomatic group of dogs was distributed in two different places in the dendrogram because they presented two different behavior patterns regarding the cellular morphology in the serum neutralization reaction the presence or absence of cellular lysis. According to this analysis it is possible to evaluate the immune status and associate it with specific markers observed in the reaction found in the Western blot strips.

RESUMO

A técnica de Western blot foi utilizada para demonstrar a presença de anticorpos do soro de cães, que apresentavam leishmaniose visceral canina, contra algumas moléculas específicas no lisado da forma promastigota de Leshmania chagasi.Através da associação da técnica de Western blot com as alterações morfológicas observadas como resultado da técnica de soro-neutralização em células McCoy (que mimetizam o macrófago) foi possível observar o papel de algumas moléculas de maior relevância para a determinação da doença em cães sintomáticos bem como o papel de outras moléculas na predição de cães infectados assintomáticos com o potencial de serem transmissores e ainda diferenciá-los como cães assintomáticos resistentes. Na análise dos soros durante a reação de immunoblotting observou-se uma variação de 9 a 27 bandas imunorreagentes, que foram comparadas utilizando-se o coeficiente de similaridade de Dice. No dendrograma construído com base no coeficiente, observou-se 50 por cento de similaridade entre as bandas totais reagentes com o lisado de promastigota formando cinco agrupamentos. A principal diferença foi observada com respeito à condição clínica, ou seja, cães sintomáticos e assintomáticos ficaram em grupos separados. Os soros dos cães assintomáticos distribuídos em dois grupos diferentes do dendrograma apresentaram padrões de comportamento diferentes, quanto à morfologia celular na reação de soro-neutralização, ou seja, a presença ou ausência de lise celular. De acordo com esta análise foi possível avaliar o status imunitário e associá-lo com determinados marcadores específicos observados na reação encontrada nas fitas de Western blot.