Caracterização molecular de isolados clínicos de Leishmania braziliensis e Leishmania guyanensis e sua associação com a resposta terapêutica ao antimoniato de meglumina no Brasil / Molecular characterization of clinical isolates from Leishmania braziliensis and Leishmania guyanensis and its correlation with the therapeutic response to meglumine antimoniate in Brazil

RESUMO

No Brasil, a leishmaniose cutânea (LC) constitui um importante problema de saúde pública, apresentando cerca de 28.000 novos casos reportados anualmente pelo Ministério da Saúde. Sete espécies de Leishmania causam a LC no Brasil, no qual a L. braziliensis e a L. guyanensis aparentam ser as mais prevalentes. Nos últimos anos, vêm sendo reportados casos clínicos que não respondem ao tratamento. O fenômeno de falha terapêutica é complexo e dentre os vários fatores envolvidos está o fenótipo de resistência a drogas no parasito. Portanto, é fundamental identificar marcadores moleculares relacionados à resposta terapêutica ao antimoniato de meglumina na LC causada por isolados de L. braziliensis e L. guyanensis no Brasil. Neste estudo analisou-se isolados de L. braziliensis e L. guyanensis obtidos de pacientes com diferentes respostas terapêuticas, observando o polimorfismo das seqüências de DNA de regiões referentes aos genes AQP1, HSP70, MRPA e TR. Além disso, através da técnica de PCR em tempo real quantitativo, realizou-se uma análise do perfil de expressão de quatro genes alvo que codificam proteínas com função de transporte (AQP1 e MRPA) e metabolismo óxido-redutor (gama-GCS e TR). A variabilidade das seqüências estudadas sugere que L. braziliensis é mais heterogênea que L. gutanensis, corroborando com estudos anteriores. Uma análise de agrupamento hierárquico não revelou uma associação da resposta terapêutica com as seqüências em estudo. Através de um modelo de regressão logística múltiplo foi observado um polimorfismo na posição 1735 do gene HSP70 com chance 7,3 vezes maior de que isolados de L. braziliensis que apresentem uma guanina ao invés de uma adenina estejam associados à falha terapêutica. Também, foram observadas várias mutações não sinônimas nos genes em estudo que podem promover alterações na estrutura e atividade da proteína e, portanto, estarem relacionadas ao fenótipo de resistência a drogas em Leishmania. O perfil de expressão gênica observado revelou que a diferença entre as fases de crescimento de promastigotas em estudo não foi informativo. Então, considerando-se apenas a espécie e a resposta terapêutica, foi observado que o gene y-GCS está superexpresso em isolados de falha terapêutica em L. guyanensis, indicando o potencial deste gene para ser utilizado no prognóstico da leishmaniose cutânea. Portanto, o presente trabalho enaltece que a diversidade fenotípica em Leishmania está além das informações presentes no genoma, podendo ser em parte explicada pelos diferentes níveis de expressão gênica observado entre os parasitos.