Avaliação de métodos alternativos para o diagnóstico laboratorial confirmatório da Doença de Chagas / Evaluation of alternative methods for the confirmatory diagnosis of Chagas disease

RESUMO

Tendo em vista a ocorrência de resultados falso-positivos, falso-negativos, contraditórios e duvidosos em todos os métodos rotineiramente usados para o diagnóstico laboratorial da doença de Chagas (DC), o objetivo deste trabalho foi avaliar métodos alternativos que pudessem contribuir para o diagnóstico laboratorial confirmatório da DC. Entre eles, a detecção de antígenos circulantes do Trypanosoma Cruzi (T. cruzi) através de imunodifusão radial dupla (IDRD), contra-imunoeletroforese (CIE), eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) e Western Blot (WB); a detecção de antígenos urinários de T. cruzi por SDS-PAGE, WB e enzimaimunoensaio (ELISA) de “sanduíche” de duplo anticorpo, e a detecção de anticorpos específicos contra frações antigênicas do T. cruzi pelo método do WB. Para tanto, utilizam-se 4 grupos de amostras de soros obtidos de 203 pacientes com DC (crônica), de 23 pacientes com resultados sorológicos prévios inconclusivos para DC, de 53 pacientes com outras doenças e de 50 indivíduos sadios. Também se utilizam 4 grupos de amostrasde urina obtidas de 50 pacientes com DC (35 crônica e 15 congênita), de 20 pacientes com DC crônica, de 11pacientes com outras doenças e de 13 indivíduos sadios. Os resultados obtidos revelaram positividade de 4,70 por cento a 25,00 por cento na IDRD e de 50,00 por cento na CIE. As técnicas de SDS-PAGE e WB não permitiram detectar a presença de antígenos circulantes de T. cruzi. Com as amostras de urina, a SDS-PAGE apresentou frações protéicas com peso molecular aparente de 20 a 84KDa; no teste de WB, a maioria dessas frações foram reconhecidas tanto pelo sorohiperimune de coelho anti-T.cruzi como pelo soro pré-imune de coelho, caracterizando inespecificidade de reconhecimento.. Através doELISA detectaram-se antígenos urinários de T.cruzi em 50,00 por cento das amostras de pacientes com DC (formas crônicas e congênita), em 45,00 por cento das amostras de pacientes com outras doenças e em nenhuma amostra de indivíduos sadios, resultando em índices de 50,00 por cento de sensibilidade e 79,20 por cento de especificidade. Das 136 amostras de soros de pacientes com DC, 118 (86,80 por cento) tiveram o resultado sorológico prévio confirmado pelo teste de WB, 16 (11,76 por cento) padrão indeterminado e 2 (1,47 por cento) padrão negativo; das 23 amostras com resultados sorológicos prévios inconclusivos, nenhum apresentou WB positivo, sendo 14 (60,86 por cento) com resultados indeterminado e 9 (39,13 por cento), negativo. Das 53 amostras de soros de pacientes com outras doenças, 28 (52,83 por cento) apresentaram resultado indeterminado e 25 (47,16 por cento), negativo no WB e das 50 amostras de soros de indivíduos sadios, apenas 8 (16,00 por cento) mostraram reatividade com padrão indeterminado e 42 (84,00 por cento) padrão negativo no WB. Esses valores corresponderam a índices de 86,80 por cento de sensibilidade e 100 por cento de especificidade. Os resultados obtidos permitem sugerir que os resultados sorológicos prévios para o diagnóstico da DC podem ser confirmados por diferentes métodos, principalmente pelo ELISA, para a detecção de antíngenos urinários de T. cruzi, e pelo teste de WB, para a detecção de anticorpos específicos contra frações antigênicas do T. cruzi que poderiam contribuir para limitar as conseqüências médicas, legais e sociais de um resultado sorológico prévio inconclusivo para o diagnóstico da DC. Esses resultados reforçam a necessidade de estudos adicionais e de contínuo esforço para o desenvolvimento de teste padrão ideal para o diagnóstico laboratorial confirmatório da DC.