Serological diagnosis and molecular characterization of Leptospira spp. in the blood and urine of bovine females from refrigerated slaughterhouses / Diagnóstico sorológico e caracterização molecular de Leptospira spp. em sangue e urina de fêmeas bovinas de matadouros-frigoríficos

ABSTRACT

Leptospirosis is an important socioeconomic disease in humans, as well as in domestic and wild animals, being caused by Leptospira spp. Bovine animals are considered reservoirs of this disease, because they intermittently disseminate the bacteria into the environment through their urine. In this way, the cattle an important source of Leptospira infection. The objective of this study was to detect Leptospira spp. antibodies and DNA in bovine females from two refrigerated slaughterhouses in the microregion of Umuarama, Paraná, Brazil. In particular, blood and urine samples from 52 crossbred bovine females older than 36 months from the two slaughterhouses were used. The microscopic agglutination test (MAT) was used to detect leptospiral antibodies, and the polymerase chain reaction (PCR) and subsequent sequencing were used to detect Leptospira DNA. The MAT yielded 22 (42.3%) serum samples considered reagent, while the nested PCR test resulted in one amplified sample (1.9%)of 289 bp. This single sample was then amplified again using primers for the SecY gene (549 bp). Sequencing of this gene characterized the bacteria as L. borgpetersenii that were similar to the serovar Hardjo of the genotype Hardjobovis. This is the first molecular confirmation of Hardjobovis-like L.borgpetersenii in the urine of crossbred bovine females older than 36 months from slaughterhouses in the microregion of Umuarama. This studys results show that it is important to combine serological and molecular diagnosis in the detection of Leptospira spp. Therefore, both methods were used to improve our understanding of the epidemiology of this disease in bovine animals from the microregion of Umuarama. In addition, the analysis informed the subsequent adoption of preventive measures and educational One Health actions to prevent economic losses related to the herd, as well as social losses related to workers and the environment.(AU)

RESUMO

A leptospirose é uma importante doença sócio-econômica acarretada pela Leptospira spp. que afeta homens e animais domésticos ou selvagens. Os bovinos são considerados reservatórios desta enfermidade, sendo importante fonte de infecção por eliminar a bactéria pela urina de forma intermitente no meio ambiente. O objetivo deste trabalho foi detectar anticorpos e DNA de Leptospira spp. em fêmeas bovinas provenientes de dois matadouro-frigoríficos da microrregião de Umuarama, Paraná, Brasil. Neste trabalho foram utilizadas amostras de sangue e urina de 52 fêmeas bovinas mestiças com idade superior a 36 meses provenientes de dois matadouros-frigoríficos. Para detecção de anticorpo anti-Leptospira spp. foi realizada a prova de Soroaglutinação Microscópica (SAM), e para a detecção de DNA foi realizada a reação em cadeia pela polimerase (PCR) e posterior sequenciamento. Na SAM,22 (42,30%) amostras de soro foram consideradas reagentes e na nested PCR uma (1,92%) amostra amplificou 289 pb, e posteriormente, a mesma amostra amplificada novamente para o gene sec Y com 549pb. O sequenciamento do gene Sec Y caracterizou o produto obtido como L. borgpetersenii semelhante ao sorovar Hardjo genótipo Hardjobovis. Esta é a primeira confirmação molecular semelhante ao genótipo Hardjobovis pertencente à espécie L. borgpetersenii em urina de fêmeas bovinas mestiças com idade superior a 36 meses proveniente de matadouros-frigoríficos localizados na microrregião de Umuarama no estado do Paraná. Os resultados deste trabalho evidenciam a importância da associação do diagnostico sorológico e molecular para a detecção de Leptospira spp. Isto é importante para o entendimento da epidemiologia desta enfermidade em bovinos da microrregião de Umuarama e adoção de medidas de prevenção e ações de educação em saúde na esfera da Saúde Única, evitando assim perdas econômicas relacionado ao rebanho e sociais relacionadas a trabalhadores e meio ambiente.(AU)