A new method for the experimental induction of secundary biliary cirrhosis in wistar rats

ABSTRACT

The aim of this study was to describe a method for the induction of experimental secondary biliary fibrosis (SBF). Forty-seven Wistar rats were submitted to hepatic duct obstruction (OB group) for thirty days without ligature, section or cannulization causing interruption of biliary flow. This technique was carried out by simple traction of the bile duct passing it through the xiphoid appendix. Nine rats were submitted to a sham operation for bile duct stricture and seven rats comprised the control group. Blood samples were collected for the measurement of total bilirubin (TB), alkaline phosphatase (AP), alanine aminotransferase (ALT) and aspartate aminotransferase (AST). Liver fragments were removed for morphological study. Thirty days after surgery TB, AP, ALT and AST levels were significantly increased in the hepatic duct ligation group compared to the sham operated group and the presence of SBF in the OB group was confirmed by morphological study of the liver. There was technical failure in 31.92% cases. The survival was 100% at fifteen days and 82.97% at the end of the experiment. We concluded that this simple surgical technique may be used to study the consequence of bile duct obstruction which could be a reversible process depending on the obstruction time. This technique can be carried out from cholestasis to fibrosis.

RESUMO

O objetivo desse experimento foi o desenvolvimento de um modelo de obstrução do ducto biliar, através de procedimento cirúrgico sem ligadura ou secção do mesmo, que permitisse a evolução para cirrose e mantivesse a via biliar extra-hepática facilmente acessível a eventuais manuseios. Foram utilizados 48 ratos Wistar, distribuídos em três grupos 32 animais foram submetidos à obstrução do ducto hepático comum (grupo OB), 9 foram submetidos à operação simulada (grupo OS) e 7 foram adotados como controle para análise histológica (grupo OC). No desenvolvimento da técnica, o ducto hepático foi isolado logo após sua emergência justa-pancreática, deixando-se 1 cm de ducto livre, reparado com fio de polipropileno. Em seguida procedeu-se à exposição do apêndice xifóide e, através de marcador de orelha de rato, foi feito um pequeno orifício circular. Passou-se, por este, o fio de polipropileno e tracionou-se até o ducto biliar formar uma alça acima do orificio do apendice xifóide. Deste modo um cateter de silicone foi colocado sob esta alça. O ducto biliar permaneceu, portanto, tracionado e exposto entre a musculatura e a pele. O fechamento da parede muscular e da pele foi feito com sutura contínua. A avaliação histopatológica do fígado destes animais e os efeitos bioquímicos séricos foram realizados após 30 dias da obstrução. Nos ratos do grupo OB ocorreu aumento significativo nas dosagens séricas da bilirrubina, das aminotransferases (ALT e AST), da fosfatase alcalina, da gamaglutamiltransferase e redução significativa da albumina sérica quando comparados aos valores das dosagens dos ratos do grupo OS. A análise histológica demonstrou a formação de nódulos regenerativos em 68,7% dos casos do grupo OB, com presença de fibrose portal (de grau leve e moderado) em 96,8% dos animais, acompanhada pela formação de septos fibrosos (de grau moderado e intenso) em 87,4 %. Houve ainda intensa proliferação de ductos biliares em 81,2%, e moderada em 18,7% dos casos. Conseguiu-se desta maneira, o desenvolvimento de um modelo experimental alternativo que provoca a interrupção do fluxo bíleo-duodenal, semelhante à oclusão das vias biliares, sem necessidade de ligadura, canulação ou secção do ducto biliar. A obstrução biliar provocada pela tração do ducto biliar oferece excelentes condições de pesquisa desde o momento da interrupção do fluxo biliar até o desenvolvimento de colestase, acompanhada pela distorção da arquitetura hepática, caracterizada por fibrose portal com formação de septos e transformação nodular multi-focal.