Protein eletropherogram of haemolymph from Apis mellifera L. bees submitted to royal jelly production / Eletroferograma de proténas de hemolinfa de abelhas Apis mellifera L. submetidos à produção de geléia real

ABSTRACT

The objective of this research was to study the eletropherogram of the proteins of the haemolymph in Apis mellifera L. worker bees by utilizing eletroforese in polyacrylamide gel. Haemolymph samples were obtained from 18 beehives of africanized honey bees and their hybrids, italian and carniolas, which were submitted to royal jelly production, either with or without access to 20% pollen protein. Haemolymph sample from recently emerged adult bees aged, 12, 18 and 24 days was obtained. These samples were extracted by introducing a 50 L micropipette tip into the dorsal heart of each bee, through the intrasegmental membrane, between the third and the fourth abdomen segments. In order to inhibit the tirosinase activity, haemolymph samples were treated with three drops of fenyltio-ureia. The dosage absorbance rate of protein for each sample were determined by the use of the spectrophotometer and the biochemical biureto method. The absorbance rate was measured at 540 nm. The PhastSystem and 8-25% gradient mini polyacrylamide gels were used in the sodium dodecyl sulfate polyacrylamide electrophoresis (SDS-PAGE) technique. Five hundred ng of protein were applied to each well. After one run of the electrophoresis, the gels were stained with silver according to the manufacturus specifications. In the haemolymph of newly emerged adult bees, the electrophoresis pattern is evenly distribute

RESUMO

O objetivo do presente trabalho foi estudar o eletroferograma de proteínas da hemolinfa de operárias de Apis mellifera L., através de eletroforese em gel de poliacrilamida. As amostras de hemolinfa foram obtidas de 18 colônias de abelhas africanizadas e suas híbridas, italianas e cárnicas, submetidas à produção de geléia real, com e sem acesso a 20% de proteína proveniente de pólen. As amostras de hemolinfa de abelhas adultas recém-emergidas, de 12, 18 e 24 dias de idade foram obtidas pela introdução de uma ponteira de aplicação de polietileno de 50 L no coração dorsal, através da membrana intrasegmental, entre o terceiro e o quarto segmentos abdominais de cada abelha. A hemolinfa extraída foi misturada com três gotas de feniltio-uréia, para inibir a atividade da tirosinase. A dosagem de proteínas foi determinada em espectrofotômetro pelo método bioquímico de biureto. A absorbância foi medida em 540 nm, e após calculada a quantidade de proteína de cada amostra. No fracionamento eletroforético das proteínas foram empregados o PhastSystem e mini géis de poliacrilamida em gradiente 8-25% na técnica de SDSPAGE. Foram aplicados 500 ng de proteína em cada ponto de aplicação. Após a corrida, os géis foram corados com prata, de acordo com as especificações do fabricante. Na hemolinfa das abelhas adultas recém emergidas, o padrão eletroforético está distribuído uniformemente entre band