Efeito de três diferentes diluidores sobre o sêmen canino submetido a dois protocolos de descongelamento / Effect of three different diluent on canine semen submitted to two thawing protocols

RESUMO

Com objetivo de avaliar o efeito de dois protocolos de descongelação do sêmen canino congelado em três diluidores foram coletados ejaculados de nove cães. Cada ejaculado foi dividido em 3 amostras, centrifugado e os pellets tratados sob diferentes protocolos 1°- meio à base de glicina e gema de ovo; 2° - meio à base de TRIS e 3° - meio M9. Foram envasadas 28 palhetas de O,5ml segundo cada protocolo. Amostras tratadas sob cada protocolo foram avaliadas (M1) quanto a motilidade, vigor e integridade das membranas. As palhetas foram refrigeradas a 5°C por 60 min. e congeladas em N2. Uma amostra de cada protocolo foi avaliada quanto motilidade, vigor e integridade das membranas após o equilíbrio (M2). Eram sempre descongeladas três pares de palhetas, sendo que cada par havia sido congelado sob um mesmo protocolo. Uma das palhetas de cada par era descongelada a 37°C por 30 segundos e outra a 72°C por 8 segundos. Cada grupo foi avaliado após o descongelamento (M3) quanto a motilidade e vigor espermático, avaliação computadorizada do movimento, integridade das membranas e avaliação acrossomal por meio de FitcPNA e PI. As amostras foram mantidas em banho Maria a 37°C por 1h para o teste de longevidade espermática e reavaliadas (M4) quanto à motilidade e vigor espermáticos, integridade das membranas. Após análise estatística concluímos que as células espermáticas caninas descongeladas a 72°C por 8 segundos apresentaram um maior somatório de bons resultados quanto aos testes de viabilidade espermática in vitro empregados.(AU)

ABSTRACT

To verify the effect of three different extenders and two thawingtemperatures on frozen-thawed canine sperm characteristics, oneejaculate from nine dogs were separately collected and processed (n=9).Each ejaculate was divided into 3 equal samples and centrifuged. Thepellets were re-suspended using 1st pellet Glicyne-egg yolk extender(GEY), 2nd pellet - TRIS extender and 3rd pellet - M9 extender and allsamples were filled in 0.5ml straws. A total of 84 straws (28 for eachprotocol) were done. The sperm motility, vigour and plasmamembrane integrity from each protocol were immediately evaluated(M1) and the straws were brought to a refrigerator at 5ºC for 60minutes. After that, a sample from each protocol was warmed up ina water bath 37ºC for 5 min. and sperm motility, vigour and plasmamembrane integrity were evaluated (M2). The straws were frozen inliquid nitrogen. One straw from each protocol was thawed at 37ºCfor 30 sec and another at 72ºC for 8 sec and the sperm motility;vigour, CASA and plasmatic membrane integrity and acrossomalstatus using FITC-PNA stain were evaluated (M3). Plasma membrane,sperm motility and vigour were evaluated after a 1-hour incubation at37ºC (M4). Statistical analysis showed that the higher temperaturehad positive effect on froze-thawed canine sperm characteristics. Thebest results were taken when canine semen was frozen in GEYextender and thawed 72ºC for 8 sec. (AU)