Viabilidade de agaricus blazei em diferentes condições de preservação / Viabilidad de agaricus blazei en diferentes condiciones de preservación / Viability of agaricus blazei under different preservation conditions

RESUMO

A técnica de transferências periódicas de fragmentos de micélio para novo meio de cultura é a mais utilizada para a preservação de Agaricus blazei. Entretanto, esta técnica apresenta maior risco de contaminação, degeneração genética e perda de caracteristicas biológicas. O desenvolvimento de técnicas de preservação que permitam a manutenção da viabilidade da espécie por mais tempo e a um menor custo é de interesse biotecnológico. Desse modo, o objetivo deste trabalho foi avaliar a viabilidade de A. blazei crescido em dois meios de cultivo e preservado à +4 ºC ou -20 ºC em diferentes recipientes de contenção. O fungo foi crescido em meio de ágar-extrato de malte ou ágar-grão de trigo moído e preservado à +4 ºC ou -20 ºC em diferentes recipientes de contenção, simples ou duplos, com adição de soluções aquosas de glicerol, sacarose, glicose, água ultrapura ou sem adição de crioprotetor. Após 1 ou 12 meses o micélio preservado foi transferido para ágar-extrato de malte para avaliação da viabilidade micelial. Os crioprotetores glicerol, sacarose e glicose, associados com o meio de cultura ágar-extrato de malte ou ágar-grão de trigo moído, em recipiente de contenção simples ou duplo são efetivos para preservação à +4 ºC por períodos curtos, um mês, mas não são efetivos para períodos longos, 12 meses. Os crioprotetores, meios de cultivo e recipientes de contenção simples ou duplos não são efetivos para criopreservação do fungo à -20 ºC. Os recipientes simples são tão eficientes quanto os recipientes duplos para evitar contaminações e preservar o fungo.(AU)

ABSTRACT

Continuous mycelial subculturing is frequently used for the preservation of Agaricus blazei. However, this technique has a higher risk of contamination, genetic degeneration and loss of biological characteristics. The development of preservation techniques that allow maintaining the viability of this species longer and at lower costs is of biotechnological interest. Thus, the objective of this study was to evaluate the viability of A. blazei grown in two culture media and preserved at +4 ºC or -20 ºC in different containment vessels. The fungus was grown on malt extract agar or grounded wheat grain agar culture medium and preserved at +4 ºC or -20 ºC in different containment vessels, single or double ones, with the addition of aqueous solutions of glycerol, saccharose, glucose, ultrapure water or without addition of cryoprotectant. After 1 or 12 months, the preserved mycelium was transferred to malt extract agar for assessment of mycelial viability. Glycerol, saccharose and glucose associated with malt extract agar or grounded wheat grain agar culture medium, in single or double containment vessels, are effective for preservation at +4 ºC for a short period, one month, but they are not effective for a longer period, 12 months. Cryoprotectants, culture media and single or double containment vessels are not effective for fungus cryopreservation at -20 ºC. Simple containment vessels are as efficient as double ones to prevent contamination and to preserve the fungus.(AU)

RESUMEN

La técnica de transferencias periódicas de fragmentos de micelio para nuevo medio de cultura es la más utilizada para la preservación de Agaricus blazei. Sin embargo, esta técnica presenta mayor riesgo de contaminación, degeneraciones genéticas y pérdidas de características biológicas. El desarrollo de técnicas de preservación que permitan la manutención y viabilidad de la especie por más tiempo y con un costo más bajo es de interés biotecnológico. De esta manera, el objetivo de este estudio fue evaluar la viabilidad de A. blazei sembrado en dos medios de cultivo y preservados en +4 ºC o -20 ºC en diferentes recipientes de contención. El hongo se cultivó en medio de extracto de agar de malta o agar de grano de trigo molido y preservado en +4 ºC o -20 ºC en diferentes recipientes de contención simple o doble, con adición de soluciones acuosas de glicerol, sacarosa, glucosa, agua ultra pura o sin adición de crioprotector. Después de 1 o 12 meses, el micelio preservado fue transferido para extracto de agar de malta para evaluación de la viabilidad del micelio. Los crioprotectores glicerol, sacarosa y glucosa, asociados con el medio de cultura extracto de agar de malta o de agar de grano de trigo molido, en recipiente de contención simple o doble son eficaces para la preservación a +4 ºC por períodos cortos, un mes, pero no son eficaces por períodos largos, como 12 meses. Los crioprotectores medios de cultivo y recipientes de contención simples o dobles no son eficaces para la criopreservación del hongo a -20 ºC. Recipientes simples son tan eficaces como los dobles para evitar contaminaciones y preservar el hongo.(AU)