Comparación de dos cepas de Leishmania en el ELISA para el diagnóstico de leishmaniosis visceral canina / Comparison of two Leishmania strains in an ELISA for the diagnosis of canine visceral leishmaniasi

La leishmaniosis visceral es una enfermedad causada por protozoos del género Leishmania, afecta fundamentalmente al hombre y a los caninos, englobando un amplio espectro de procesos patológicos que parten desde cuadros cutáneos autocurables a viscerales con desenlace fatal. La leishmaniosis se conoce en Paraguay desde los años 1913; y se observa un aumento de los casos en paralelo al proceso de deforestación y expansión agrícola. La infección en los caninos es causada por parásitos del género Leishmania complejo L. donovani, especies L. infantum en el viejo mundo y L. chagasi en el nuevo mundo. Entre las técnicas de diagnóstico serológico se destacan la aglutinación directa (DAT), la inmunofluorescencia indirecta (IFI), el ELISA, la inmunocromatografía y el inmunoblotting. La sensibilidad y especificidad de cada una de ellas dependen en gran medida del antígeno utilizado. Sin embargo, pocos análisis comparativos se han hecho con tests que utilizan diferentes antígenos para identificar el mejor antígeno. El trabajo realizado fue un estudio analítico que tuvo como objetivo comparar a las dos cepas de leishmania: L. chagasi y L. donovani utilizadas en el ELISA indirecto para el diagnóstico serológico de leishmaniosis visceral canina que se realiza en el IICS. Del total de muestras analizadas, 173/185 (94%) resultaron concordantes. Utilizando la prueba de ELISA con antígeno L. chagasi como referencia, el antígeno de L. donovani dio una positividad y negatividad del 92% y 100% respectivamente. Se obtuvo una excelente concordancia (Kappa 0.82) y una fuerte asociación de 125.29 (p<1x10-7) por chi2. Estos resultados sugieren que el antígeno L. donovani podría ser utilizado en el ELISA indirecto para la detección de anticuerpos anti-leishmania en caninos

Concordancia de antígenos de dengue en el ELISA de captura de IgM (MAC ELISA) en el IICS-UNA / Concordance of dengue antigens M antibody-capture ELISA (MAC ELISA) in the IICS-UNA

El dengue es una enfermedad aguda grave considerada actualmente como infección reemergente, cuyo vector principal es el Aedes aegypti. En Paraguay en el 2007 fueron reportados 28.181 casos, 55 se clasificaron como fiebre hemorrágica del dengue de los cuales 7 fallecieron. El 90% de los casos fueron de Asunción y del Departamento Central,10% del resto del país. En los últimos años se han desarrollado diferentes sistemas inmunoenzimáticos para el diagnóstico del dengue, entre ellos el ELISA de captura de IgM (MAC ELISA). El objetivo de este estudio observacional analítico de corte transverso fu ecomparar la prueba del MAC ELISA desarrollada en el Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud (IICS) utilizando antígenos suministrados por el Instituto Pedro Kouri(IPK) de Cuba y el Evandro Chagas de Brasil, con el kit comercial ELISA IgM por capturapara virus del dengue (Focus Diagnostics Inc. Cypress, CA, USA). Fueron seleccionados alazar 92 sueros de pacientes codificados que concurrieron al IICS con sospecha de dengue, respetándose la confidencialidad de los mismos. La concordancia obtenida fue del94.6% (Índice Kappa: 0.891) utilizando el antígeno del IPK y 96.7% (Índice Kappa:0.9350) con el antígeno del Evandro Chagas, mostrándose alta significancia estadística(p<0.00001) en ambos casos. La excelente concordancia obtenida con los dos antígenos indica que los mismos pueden ser utilizados indistintamente en la prueba del MAC ELISA desarrollada en el IICS, a fin de apoyar el diagnóstico del dengue a menor costo y quesería de producción local.

Dengue is an acute disease currently considered a re-emerging infection, whose main vector is Aedes aegypti. In 2007, 28,181 cases were reported in Paraguay, 55 were classified as dengue hemorrhagic fever and seven of them died. Ninety percent of the cases were from Asunción and the Central Department and the remaining 10% from the rest of the country. In recent years various immunoenzymatic systems have been developed immunoassay for the diagnosis of dengue, including the M antibody captureELISA (MAC ELISA). The aim of this cross-sectional observational study was to compare the MAC ELISA test developed at the Instituto de Investigaciones en Cienciad de la Salud(IICS) using antigens supplied by the Instituto Pedro Kouri (IPK) of Cuba and Evandro Chagas of Brazil with a commercial kit of M antibody capture ELISA for dengue virus (Focus Diagnostics Inc. Cypress, CA, USA). Ninety two coded serum samples wererandomly selected from patients who attended the IICS with suspected dengue, respecting their confidentiality. The concordance obtained was 94.6% (Kappa Index: 0.891) using the IPK antigen and 96.7% (Kappa index: 0.9350) with the antigen from Evandro Chagas showing high statistical significance (p<0.00001) in both cases. The excellent concordance obtained with the two antigens indicates that they can be used indistinctly in the MAC ELISA test developed in the IICS to support the diagnosis of dengue at a lower cost and would be locally produced.

Concordancia entre las pruebas de ELISA avidez IgG desarrollados en el Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud y un ELISA avidez comercial / Concordance between the IgG avidity ELISA tests developed at the Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud and a commercial avidity ELISA

La infección aguda de toxoplasmosis en la mujer durante el embarazo en su mayor parte es asintomática y detectable solo por anticuerpos lo que podría afectar severamenteal feto si no es diagnosticada y tratada precozmente. En este estudio observacionalanalítico de corte transverso se comparó la prueba de ELISA Avidez IgG paratoxoplasmosis desarrollado en el Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud(IICS) con un test comercial de avidez InmunoLISA Organics USA. Para la concordanciase utilizó 41 sueros mantenidos a -20 ºC procedentes de la seroteca del Departamento de Producción-Bioquímica seleccionados al azar. La concordancia obtenida fue de 92.7% y un índice de Kappa de 0.820 con IC95% (0.6-1) y p<0.0001. El índice bajo de avidez sugiere una infección aguda pero para el diagnóstico debería estar acompañado de otras pruebas serológicas y la clínica del paciente. En cambio un índice alto es diagnóstico de una infección crónica.

The acute infection caused by Toxoplasma gondii in pregnant women is mostly asymptomatic and detectable only by antibodies that could severely affect the fetus if the infection is not diagnosed and treated precociously. In this cross-sectional observational,the analytical the IgG avidity ELISA test for toxoplasmosis, developed at the Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud (IICS), was compared to a commercial avidity kit InmunoLISA (Organics, USA). For the concordance, 41 serum samples kept at -20ºC atthe Department of Production-Biochemistry of IICS were tested. The concordance obtained was 92.7% and a Kappa index of 0.820 with IC95% (0.6-1) and p <0.0001. The low avidity index suggests an acute infection but for diagnosis this result should beaccompanied by other serologic tests and clinical symptoms. Instead, a high avidity index suggests a chronic infection.

Mantenimiento y titulación del virus de dengue para obtención de antígeno viral / Maintenance and titration of dengue virus for the obtainment of viral antigens

El dengue es un grave problema de salud pública que no posee vacuna ni tratamiento específico. El método de diagnóstico más utilizado es el serológico, específicamente, la detección de anticuerpos IgM anti-dengue. Los antígenos virales utilizados en este método pueden ser preparados en cultivo de células de Aedes albopictus (C6/36). El objetivo de este trabajo fue el mantenimiento de los cuatro serotipos virales (D1 (RIO), D2 (RIO), D3 (H-87), D4 (BV)) en células C6/36 para la futura preparación de antígenos virales. Las células C6/36 fueron cultivadas en medio L-15 con 10% de SFB a 28ºC, e infectadas con 50 ml de cada uno de los serotipos virales por 5 a 7 días. Una vez confirmada la infección por inmunoflurescencia indirecta, los virus fueron titulados por la técnica de placa de lisis. Los títulos de los serotipos fueron D1 (RIO) (2,9 x 106 PFU/ml), D2 (RIO) (4,4 x107 PFU/ml), D3 (H87) (6,4 x 107 PFU/ml) y D4 (BV) (5,1 x106 PFU/ml). La producción de antígenos virales es de gran importancia dado que los mismos pueden ser utilizados en diversos métodos diagnósticos.

Dengue is a serious public health problem that has neither vaccine nor specific treatment. Serology is the most frequently used diagnosis method, specifically the anti-dengue IgM detection. The viral antigens employed in this method could be prepared from Aedes albopictus cell cultures (C6/36). The objective of this study was to maintain the four viral serotypes (D1 (RIO), D2 (RIO), D3 (H-87), D4 (BV)) on C6/36 cells for the preparation of viral antigen in the future. The C6/36 cells were cultured in L-15 medium supplemented with 10% FCS, infected with 50 µl of each viral serotype and then incubated for 5-7 days at 28°C. After confirmation of the infection by indirect immunofluorescence (IIF), viral titration was performed by lysis plaque assay. The serotypes titres obtained were as follows: [2.9 x 106 PFU/ml] for D1 (RIO), (4.4 x107 PFU/ml) for D2 (RIO), (6.4 x 10 7 PFU/ml) for D3 (H87) and (5.1 x106 PFU/ml) for D4 (BV). The production of viral antigens is very important because they could be used in several diagnosis methods.

Estudio de Fiebre Amarilla en primates en áreas de brote de los departamentos de San Pedro y Central del Paraguay / Study of Yellow Fever in primates in outbreaks areas of the departments of San Pedro and Central in Paraguay

La Fiebre Amarilla (FA) es una de las más importantes zoonosis que afecta a poblaciones humanas. La FA silvestre es imposible de ser erradicada, manteniéndose activa en zonas tropicales en África y Sudamérica. Todas las especies de primates son susceptibles y se consideran reservorios en el medio silvestre. La mortalidad es baja, se desconoce su valor con precisión, sin embargo existen epizootias con alta mortalidad, en humanos varía entre 20-50%. El objetivo de este trabajo fue buscar evidencias de FA en primates capturados en áreas de brote de FA de los departamentos de San Pedro y Central del Paraguay mediante la técnica de Neutralización por reducción de placas para FA cepa vacunal 17 D. Los resultados en los 35 primates estudiados fueron negativos, quizás por lo tardío del momento en la toma de muestras y bajo número de primates capturados.

Yellow Fever (YF) is one of the most important zoonotic diseases affecting human population. It is impossible to eradicate wild YF remaining active in tropical zones of Africa and South America. All species of primates are susceptible and are considered reservoirs in wild regions. Mortality is low and its precise value is unknown though there are epizootics with high mortality rates and in humans varies between 20-50%. The objective of this study was to search for evidence of YF in primates caught in YF outbreaks areas of the departments of San Pedro and Central in Paraguay through the neutralization technique by plates reduction for YF vaccine strain 17 D. The results in the 35 primates studied were negative, perhaps because of the lateness of the time sampling and the low number of captured primates.