Validation of reference genes for accurate normalization by quantitative polymerase chain reaction in sugarcane drought stress studies using two cultivars / Validação de genes de referência para normalização de reação em cadeia de polimerase quantitativa em estudos de estresse hídricoem cana-de-açúcar

ABSTRACT: The aim of this study was to analyze the expression of putative reference genes in sugarcane under drought stress. The varieties RB72454 and RB72910 were cultivated and the treatments control and drought stress applied to 135-day-old plants grown under field conditions. The stress level of the plants was measured by rate of photosynthesis, transpiration, and stomatal conductance. For each biological replicate, expression analyses were conducted using quantitative polymerase chain reaction for the genes α-tubulin, β-tubulin, β-actin, cyclophilin, eukaryotic elongation factor 1, glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase (GAPDH), histone H3 and ubiquitin. Stability was evaluated using the geNorm, NormFinder, and BestKeeper software packages. Among the candidate genes, GAPDH was identified as the most stable in all software, indicating its suitability for gene expression studies in sugarcane undergoing drought stress; the gene β-actin was the second most stable. These findings suggest using GAPDH and β-actin for normalization in relative gene expression in sugarcane.

RESUMO: O objetivo do estudo foi analisar a expressão de genes de referência em cana-de-açúcar sob estresse hídrico. As cultivares RB72454 e RB72910 foram cultivadas em campo e os tratamentos controle e estresse foram aplicados após 135 dias. O estresse das plantas foi mensurado utilizando as variáveis fisiológicas: taxa fotossintética, transpiração e condutância estomática. Para cada repetição biológica, a expressão gênica foi conduzida usando PCR tempo real para os genes α-tubulina, β-tubulina, β-actina, ciclofilina, fator 1 de alongamento eucariótico, gliceraldeído 3-fosfato desidrogenase (GAPDH), histona H3 e ubiquitina. A estabilidade dos genes foi avaliada usando os softwares geNorm,NormFinder e BestKeeper. Entre os genes candidatos, GAPDH foi identificado como o mais estável nos três métodos de análises, indicando ser estável para estudos de expressão gênica em cana-de-açúcar sob estresse hídrico; seguindo o gene β-actina como o segundo mais estável. Os resultados concluem que os genes GAPDH e β-actina são indicados para normalização em expressão gênica relativa, associada com estresse hídrico em cana-de-açúcar.

High-level phylogeographic structuring of Neoleucinodes elegantalis Guenée (Lepidoptera, Crambridae) in Brazil: an important tomato pest

ABSTRACT Neoleucinodes elegantalis is an important tomato pest in Brazil, occurring throughout the country and resulting in economic losses in agriculture. In several species, biogeographic studies in Brazil indicate the structuring of populations, following the refuge model, with a split between the populations of the northeast and the southeast regions of Brazil. The objective of this work was to analyze the phylogeography of N. elegantalis in Brazil, understanding its population structure and the demographic patterns. Larvae were collected from eight locations throughout Brazil, and the mitochondrial cytochrome c oxidase subunit 1 gene was analyzed. A total of 628 bp in 51 individuals were obtained, showing 12 haplotypes with a haplotype diversity of 0.836. Spatial analysis of molecular variance (SAMOVA) and cluster analysis showed two populations, indicating population structuring between individuals from the northeast (population 1) and southeast (population 2) regions of Brazil. Phylogenetic analysis indicated that the clades corresponding to the groups defined by SAMOVA have a divergence time of 0.2–0.5 million years, suggesting isolation during climatic events and a separation of the two populations coinciding with the predicted refuges to the Atlantic forest.

Genetic variability in maize and teosinte populations estimated by microsatellites markers / Variabilidade genética em populações de milho e teosinto estimada por marcadores microssatélites

Wild species are important sources of genetic variability and may be exploited by breeding programs. Crosses between teosinte and maize occur freely and teosinte serves as genetic source of agronomic traits for introduction in maize. The objective of this study was to estimate genetic variability among and within maize and teosinte populations (Zea mays mexicana). Two sweet maize populations (BR400 and BR402), two common maize populations (Suwan and Pampa) and one teosinte population were analyzed using microsatellites markers. Results indicated that 64,5 percent of the variation was detected within the populations, suggesting the possibility of obtaining genetic progress by selection within each population. The analysis with 25 microsatellites loci enabled the identification of 92 alleles with a mean of 3.7 alleles per locus. The average Polymorphism Information Content (PIC) was 0.52. The percentage of polymorphic loci varied from 64 percent in the BR400 and Pampa populations to 80 percent in the teosinte population. The estimated genetic distance confirmed the genomic similarity of maize and teosinte.

Espécies silvestres são fontes importantes de variabilidade genética e podem ser exploradas pelos programas de melhoramento. Cruzamentos entre teosinto e milho ocorrem naturalmente, e o teosinto pode ser utilizado como fonte de caracteres agronômicos para introdução em milho. O objetivo deste estudo foi estimar a variabilidade genética entre e dentro de populações de milho e teosinto (Zea mays mexicana). Duas populações de milho doce (BR400 e BR402), duas de milho comum (Suwan e Pampa) e uma de teosinto foram analisadas utilizando-se marcadores microssatélites. Os resultados indicaram que 64,5 por cento da variação foi detectada dentro das populações, sugerindo a possibilidade de obtenção de progresso genético através da seleção dentro de cada população. A análise de 25 locos microssatélites permitiu identificar 92 alelos, com uma média de 3,7 alelos por loco. O percentual de locos polimórficos variou de 64 por cento nas populações BR400 e Pampa a 80 por cento na população de teosinto. A distância genética estimada confirmou a similaridade genética entre milho e teosinto.

Valvoplastia mitral com duplo cateter-baläo, avaliaçäo hemodinâmica de 52 casos um ano depois do procedimento / Mitral Valvoplasty by Double Balloon. Hemodynamic Evaluation of 52 Cases One Year After the Procedure

Objetivo - Avaliar os resultados hemodinâmicos e angiográficos tardios da valvoplastia mitral por duplo cateter-baläo, para tratamento da estenose mitral reumática. Métodos - Cinquenta e dois pacientes foram submetidos à avaliaçäo, sendo 84,6// do sexo feminino, com idade média de 21,9 anos. Oitenta e um por cento estavam na classe funcional I (NYHA), e 5,7// exibiam fibrilaçäo atrial, 18 meses após dilataçäo. Todos foram submetidos a estudo ecocardiográfico e cateterismo cardíaco com angiografia, 1 ano após o procedimento. Resultados - quarenta e seis pacientes (88,5//) exibiram, imediatamente após a valvoplastia, áerea valvar > 1,50cm². Em 6(11,5//), a área da valva mitral foi ó 1,50cm². Os casos em que se obteve área valvar ò 1,50cm², tiveram boa evoluçäo clínica, sem perda dos bons resultados hemodinâmicos e ecocardiográficos iniciais, incluindo o gradiente de pressäo diastólica mitral, as pressöes médias do átrio esquerdo e da artéria pulmonar e a área valvar mitral. Nos 6 casos em ques e obteve area valvar ó 1,50cm², 2 tiveram evoluçäo favorável, 2 foram redilatados, 1 aguarda tratamento cirúrgico e outro mantém-se em tratamento clínico a despeito do resultado hemodinâmico insatisfarório. Em 3 dos 52 casos (5,7), demonstrou-se, após o procedimento, a existência de comunicaçäo interatrial, em 2 sem repercussäo hemodinâmica, e, no 3º, com repercussäo, foi indicada a correçäo cirúrgica do defeito. A insuficiência mitral ocorreu em 16 casos (30,7//), sendo de grau + em 8 e de + a ++, nos demais, sem nenhum agravamento neste período evolutivo. Conclusäo - A valvoplastia mitral por duplo cateter-baläo é método eficaz para tratamento da estenose mitral reumática, havendo boa evoluçäo tardia, nos casos que apresentam área ò 1,50cm² imediatamente após a dilataçäo

Purpose - To evaluate the late hemodynamic and angiographic results of 52 patients who underwent mitral valvoplasty by the double balloon technique in the treatment of the rheumatic mitral stenosis. Methods - The mean follow-up was of 18 months and the patients had a Doppler-echocardiogram and cardiac catheterization one year after dilatation. Of the 52 patients 84.6% were femule and the mean age was 21.9% years. Eighty one percent were in NYHA class I whereas 5.7% had atrial fibrillation at the end of 18 months. Results Immediatly after valvoplasty 46 patients (88.5%) had a valvar area larger, and 6 (11.5%) smaller than 1.5 cm2 . The first group had a good clinical outcome with maintenance of the clinical, echocardiographic and angiographic results in the late followup, including the dyastolic gradient and the valvar area. Of the 6 cases with mitral area smaller than 1.5 cm2, 2 had a good clinical evolation, 2 were redilated, I was scheduled for surgery and the last one is under clinical management but with poor hemodynamic results. Three (5.7%) cases developed an atrial septal defect after the procedure, with hemodynamic repercussion in 1. Mitral regurgitation developed in 16 cases (+ in 8, +/++ in 8) without changes during the follow-up period. Conclusion - Double balloon mitral valvoplasty is a safe effective method in the treatment of the rheumathic mitral stenosis, and offers a better evolution in patients with a valvar area larger than 1.5 cm2 after the dilatation