Analysis of the protein profile of the venoms of snakes Bothrops asper, Bothrocophias myersi and Crotalus durissus from the Colombian Andean Region obtained by RP-HPLC / Análisis del perfil proteico de los venenos de Bothrops asper, Bothrocophias myersi y Crotalus durissus serpientes de la Región Andina en Colombia obtenidos por RP-HPLC

ABSTRACT Snake venoms comprise a highly complex mixture of proteins, and there is also a high interspecific and intraspecific variability in their composition, even in the same region. Our aim was to compare the composition of the venoms of Bothrocophias myersi, Crotalus durissus, and Bothrops asper, snakes from the Colombian Andean region by Reverse-Phase High-Performance Liquid Chromatography (RP-HPLC). The venoms were given to the research group under an agreement with Fundación Zoológica de Cali. The venoms pool was obtained by manual extraction, lyophilized and frozen. The venom protein was quantified by direct measurement with Nanodrop® 280 nm. The protein composition was established by RP-HPLC, using a Lichosper 100 RP, C18 column (250X4 mm) with a pore size of 5-m, as well as by Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis (SDS-PAGE). The highest quantity of protein was found in the venom of B. myersi (108.6 mg/ mL) followed by C. durissus (78.1 mg/mL) and B. asper (74.1 mg/mL). All venoms showed bands of 15 and 50 KDa by using SDS-PAGE. B. myersi venom chromatogram exhibited 16 peaks by RP-HPLC. We conclude that the composition of the three venoms is quite similar, being phospholipase A2 the common protein therein, and together with metalloproteinases they were the most abundant protein families in the venom of B. myersi. SDS-PAGE and RP-HPLC techniques allow a first approach to the profile of the venoms, which in turn could clarify the clinical syndrome produced.

RESUMEN Los venenos de las serpientes comprenden una mezcla compleja de proteínas, y existe una alta variabilidad interespecífica e intra-específica en su composición, incluso en la misma región. Nuestro objetivo fue comparar la composición de los venenos de Bothrocophias myersi, Crotalus durissus y Bothrops asper de la región andina de Colombia, mediante cromatografía líquida de alta eficiencia en fase reversa (RP-HPLC). Los venenos fueron entregados al grupo de investigación mediante un convenio con la Fundación Zoológica de Cali. El pool de venenos fue obtenido por extracción manual, liofilizado y congelado. La proteína de los venenos fue cuantificada por Absorbancia 280nm por medición directa con Nanodrop®. La composición proteica se estableció por RP-HPLC, utilizando una columna Lichosper 100 RP, C18 (250X4 mm) con un tamaño de poro de 5-jm, así como por electroforesis en gel dodecil sulfato de sodio-poliacrilamida (SDS-PAGE). La mayor cantidad de proteínas se encontró en el veneno de B. myersi (108.6 mg/mL), seguido de C. durissus (78.1 mg/mL) y B. asper (74.1 mg/mL). Todos los venenos mostraron bandas de 15 y 50 KDa por SDS-PAGE. El cromatograma de B. myersi exhibió 16 picos por RP-HPLC. Concluimos que la composición de los tres venenos es bastante similar, siendo la fosfolipasa A2 la proteína común en estos y junto con las metaloproteinasas fueron las familias de proteínas más abundantes en el veneno de B. myersi. Las técnicas de SDS-PAGE y el RP-HPLC permiten un primer acercamiento al perfil de los venenos, lo que a su vez podría contribuir a esclarecer el síndrome clínico producido.

Expresión génica de ligandos mica, micb y ulbp (1-6) del receptor NKG2D de células natural killer y metaloproteinasas adam10, adam17 y mmp14 en lineas celulares de cáncer de cervical / Gene expression of mica, micb and ulbp (1-6) ligands of the NKG2D receptor of natural killer cells and metalloproteinases adam10, adam17 and mmp14 in cells lines of cervical cancer

RESUMEN El CCU es la segunda causa de muerte en mujeres de nuestro país. Dentro de los primeros mecanismos de defensa del hospedero se encuentra la respuesta inmune de las células NK y su función lítica a expensas de su receptor activador NKG2D, el cual posee como ligandos mica, micb y ulbp (1-6), los cuales se expresan en células transformadas y/o infectadas por virus. Uno de los mecanismos de evasión por parte de la célula tumoral es el clivaje de estas proteínas a través de metaloproteinasas como adam10, adam17 y mmp14. Se analizó la expresión de estos ligandos y metaloproteinasas mediante PCR tiempo real, en lineas celulares de referencia para cáncer cervical como HeLa (positiva para VPH-18) y C33A (negativa para VPH). Se obtuvieron valores representativos de expresion relativa genica con diferencias significativas asi: mmp14 en linea HeLa (p= 0.006); y mica y ulbp-3 en la linea C33A (p= 0.020 y p=0.003 respectivamente). Por lo tanto, se podría sugerir que la expresión de mmp14 se encuentra posiblemente involucrados con la presencia de VPH causante del cancer cervical y la respuesta inmunne innata desarrollada.

ABSTRACT Cervical cancer is the second leading cause of death in women in our country. Within the first host defense mechanisms is the immune response of NK cells and their lytic function at the expense of its NKG2D receptor activator which has as ligands mica, micb and ulbp (1-6), which are expressed in transformed cells and / or virally infected. One of the mechanisms of evasion by the tumor cell is the cleavage of these proteins through metalloproteinases as adam10, adam17 and mmp14. We analyzed the expression of these ligands and metalloproteinases by real time PCR, in reference to cell lines HeLa cervical cancer (positive for HPV-18) and C33A (negative for HPV). We obtained representing relative gene expression with significant differences from the other lines of study as follows: mmp14 in HeLa (p = 0.006); and mica and ulbp-3 in C33A (p = 0.020 and p = 0.003 respectively). Thus one might suggest that the expression of mmp14 is possible involved with HPV presence causing high risk of cervical cancer and innate inmunne response developed.

Expresión de EDNRB y CDX2 posibles biomarcadores en progresión al cáncer cervical / EDNRB and CDX2 expression as possible biomarkers in progression to cervical cancer

RESUMEN De acuerdo a la historia natural del cáncer del cuello uterino, en donde las lesiones preneoplásicas de bajo y alto grado pueden presentar fenómenos de regresión o progresión, existe gran interés en la búsqueda de biomarcadores que permita predecir la evolución de las lesiones preneoplásicas del cérvix hacia la progresión o regresión de la enfermedad. Estos biomarcadores pudieran ser de origen genético, o epigenético que alteren la expresión de los genes y que pudieran estar asociados con la carcinogénesis en diferentes tipos de tejido humano. El objetivo del estudio fue analizar la expresión del mARN de los genes SFRP1, PTPRN, CDO1, EDNRB, CDX2, EPB41L3 y HAND1 en muestras negativas para lesiones intraepiteliales cervicales (n=9), muestras con lesiones intraepiteliales de bajo grado (n=10) y alto grado (n=11). Se realizó análisis de expresión de los genes mencionados mediante qRT-PCR y el análisis de los datos se realizó mediante la prueba no paramétrica de ANOVA. La diferencia estadística se determinó en valores p< 0,05. Para los genes EDNRB y CDX2 se observó disminución 66,7% en las muestras sin alteraciones histológicas cervicales, comparado con una disminución en la expresión del 50% en muestras con LIEBG y para el grupo de LIEAG del 36,4% para el gen EDNRB y del 27,3% para el gen CDX2 dando una diferencia estadísticamente significativa p= 0,02. Sugiriendo que EDNRB y CDX2 podrían ser útiles como posibles biomarcadores en la carcinogénesis cervical.

ABSTRACT According into account the natural history of cervical cancer, where low- and high-grade preneoplastic lesions may present regression or progression phenomena, there is great interest in the search for biomarkers to predict the behavior of preneoplastic lesions of the cervix. These biomarkers may be of genetic origin, or epigenetics that alter the expression of genes and that may be associated with carcinogenesis in different types of human tissue. The objective of the study was to analyze the expression of the mRNA of the SFRP1, PTPRN, CDO1, EDNRB, CDX2, EPB41L3 and HAND1 genes in samples negative for cervical intraepithelial lesions (n = 9), low grade intraepithelial lesions (n=10) and high grade (n = 11). Expression analysis of the mentioned genes was performed using qRT-PCR and data analysis was performed using the non-parametric ANOVA test. The statistical difference was determined in values p <0.05. For the EDNRB and CDX2 genes, a 66.7% decrease was observed in the samples without cervical histological alterations, compared to a decrease in expression of 50% in LIEBG samples and 36.4% in the LIEAG group for the EDNRB gene And 27.3% for the CDX2 gene giving a statistically significant difference p = 0.02. Suggesting that EDNRB and CDX2 could be useful as potential biomarkers in cervical carcinogenesis.

Presence and count of S. mutans in children with dental caries: before, during and after a process of oral health education

Dental caries is an infectious, multifactorial, localized, transmissible process that leads to the destruction of hard dental tissue. Streptococcus mutans is considered to be the main microorganism associated with its development. The aim of this study was to determine presence and count of S. mutans in saliva samples from children with dental caries before and after an educational process including interviews, lessons, lectures, educational workshops and recreational activities on the importance of oral care and hygiene. Twentythree 3 to 6 year old schoolchildren provided 3 unstimulated saliva samples: one before the educational process, one at 3 months and one at 6 months into the educational process. The samples were serially diluted and plated on Mitis Salivarius agar supplemented with bacitracin and 20% sucrose, and incubated anaerobically for 2 days at 37oC. Presumptive S. mutans isolates were identified with biochemical tests. Before the beginning of the educational process, and at 3 and 6 months into the educational process, S. mutans was found, respectively, in 22 (95.6%), 15 (65.2%) and 10 (43.5%) of the 23 children. The S. mutans count was reduced by 64.8% and 86.6% at 3 and 6 months, respectively, compared to the levels found before the educational process. These results indicate that educational intervention produced a significant reduction in S. mutans levels in the saliva of children with dental caries at 3 and 6 months into the educational process (AU)

La caries dental es un proceso infeccioso multifactorial, localizado y transmisible que se caracteriza por la destrucción del tejido dental duro. Streptococcus mutans es considerado el principal microorganismo asociado al desarrollo de esta enfermedad. El objetivo de este estudio fue determinar la presencia y recuento de S. mutans en saliva de niños con caries dental antes y después de un proceso educativo. Con este fin se tomó saliva no estimulada de 23 niños con caries dental pertenecientes a un centro educativo con edades de 3 a 6 años. En todos los niños se tomaron 3 muestras de saliva: antes del proceso educativo y a los 3 y 6 meses de iniciado el proceso educativo. El proceso educativo consistió en entrevistas, enseñanzas, conferencias, talleres educativos y actividades lúdicas sobre la importancia del cuidado e higiene oral. Después de su recolección, las muestras de saliva fueron serialmente diluidas y sembradas en Agar Mitis Salivarius con bacitracina y sacarosa al 20%. Los medios de cultivo sembrados se incubaron en anaerobiosis durante 2 días a 37ºC y los aislamientos presuntivos de S. mutans se identificaron con pruebas bioquímicas. Antes del inicio del proceso educativo, a los 3 y 6 meses de iniciado el proceso educativo se encontró S. mutans, respectivamente, en 22 de los 23 niños (95.6%), en 15 de los 23 niños (65.2%) y en 10 de los 23 niños (43.5%). En cuanto al recuento de S. mutans, se encontró una reducción de 64.8 % y 86.6% a los 3 y 6 meses, respectivamente, en comparación a los niveles encontrados antes del inicio del proceso educativo. En conclusión, los resultados indican que la intervención educativa realizada produjo una reducción significativa en los niveles de S. mutans en saliva de niños con caries dental después de 3 y 6 meses de iniciado el proceso educativo (AU)

Tratamiento de cáncer de seno y farmacogenética / Treatment of breast cancer and pharmacogenetics

El cáncer de seno es un grupo de enfermedades con gran impacto a nivel mundial dado que es una de las patologías con mayor prevalencia en mujeres y el cáncer con mayor tasa de mortalidad en varios países (GLOBOCAN 2012). El uso de la farmacogenética y farmacogenómica, en pacientes con cáncer de seno tiene como fin, generar una salud personalizada que permita tratar a cada paciente como individuo y no como enfermedad, pues cada paciente tiene necesidades particulares a la hora de suministrarle un tratamiento. El propósito de esta revisión es identificar las variantes genéticas reportadas en la literatura científica, donde se evalúan diferentes poblaciones y su posible uso como herramienta para medicina de precisión. En población colombiana es poca la caracterización poblacional que existe y por tanto estudios poblacionales son necesarios para definir los perfiles genéticos que deberán implementarse en nuestra población.

Breast cancer is one of the most prevalent diseases in women with increasing mortality in several countries (GLOBOCAN 2012). The use of pharmacogenetics and pharmacogenomics in patients with breast cancer allows generating personalized health for treating each patient as an individual, as each patient has unique needs when supplying a treatment. The purpose of this review is to identify genetic variants reported in the scientific literature, where different populations are evaluated and for possible use as a tool for medical precision. Colombian population is unique and therefore population studies are needed to define the genetic profiles to be implemented.

Approaches and perspectives to toxicogenetics and toxicogenomics / Aproximaciones y perspectivas en toxicogenética y toxicogenómica

Toxicology is one of the scientific disciplines that has most evolved in recent years due to scientific and technological advances that have created a deeper understanding of the genetic and molecular basis for appreciative variability in toxic response from one person to another. The application of this knowledge in toxicology is known as toxicogenetics and toxicogenomics. The latter is the discipline that studies the genomic response of organisms exposed to chemical agents, including drugs, environmental pollutants, food additives, and other commonly used chemical products. The use of emerging omic technologies, such as genomics, transcriptomics, proteomics, metabolomics and bioinformatics techniques, permits the analysis of many variants of genes simultaneously in an organism exposed to toxic agents in order to search for genes susceptible to damage, to detect patterns and mechanisms of toxicity, and determine specific profiles of gene expression that give origin to biomarkers of exposure and risk. This constitutes predictive toxicology.

La toxicología es una de las disciplinas científicas que más ha evolucionado en los últimos años; esto se ha dado gracias a los avances científicos y tecnológicos que han generado un conocimiento cada vez más profundo de las bases genéticas y moleculares de la variabilidad en la respuesta tóxica de unas personas a otras. La aplicación de estos conocimientos a la toxicología se conoce como toxicogenética y toxicogenómica; esta última es la disciplina que estudia la respuesta genómica de los organismos expuestos a agentes químicos, dentro de los que se incluyen fármacos, contaminantes ambientales, aditivos alimentarios y otros productos químicos de uso común. Dichos estudios se adelantan mediante el empleo de las tecnologías ómicas emergentes, como genómica, trascriptómica, proteómica, metabolómica y las técnicas bioinformáticas, las cuales permiten analizar múltiples variantes de genes simultáneamente de un organismo expuesto a agentes tóxicos, con el propósito de buscar los relacionados con susceptibilidad al daño, detectar de patrones y mecanismos de toxicidad, determinar moléculas endógenas susceptibles al ataque de agentes tóxicos y determinar perfiles específicos de expresión de genes que pueden originar biomarcadores de exposición y riesgo, constituyendo la toxicología predictiva.

Rol biológico y aplicaciones de los miRNAs en cáncer de seno / Biological role and applications of miRNAs in breast cancer

Los miRNAs son pequeños RNAs que participan en diversos procesos de regulación génica, mediante ribointerferencia y juegan un papel clave en diversos procesos biológicos, tales como proliferación celular, diferenciación y apoptosis. En consecuencia, la expresión alterada de miRNAs contribuye a la enfermedad humana, incluyendo cáncer. En esta revisión, nos centraremos en los recientes hallazgos de miRNAs que inciden en el desarrollo de cáncer y particularmente en cáncer de seno, simultáneamente evaluaremos sus mecanismos de regulación, su clasificación, su uso como marcadores de invasión tumoral, de sensibilidad a fármacos y adicionalmente exploraremos la utilidad de los miRNAs en el diagnóstico, seguimiento y tratamiento individualizo. Finalmente encontramos que los miRNAs representan una gran alternativa para entender las bases moleculares de los procesos tumorales implícitos en cáncer de seno y una vez se conozcan todas sus dianas, será posible dilucidar al menos en parte este proceso complejo y multigénico, ayudado mediante herramientas como la generación de bases de datos, para reportan la expresión diferencial de miRNAs, elementos que nos permitirá realizar medicina preventiva y mejorar la calidad de vida de los pacientes y sus familias.

MiRNAs are small RNAs that are involved in various processes of gene regulation by RNAi and play a key role in various biological, such as cell proliferation, differentiation and apoptosis processes. Consequently, the altered expression of miRNAs contribute to human disease, including cancer. In this review, we will focus on the recent findings of miRNAs that affect the development of cancer, particularly breast cancer, simultaneously evaluate their regulatory mechanisms , their classification , their use as markers of tumor invasion, drug susceptibility and further explore the utility of miRNAs in the diagnosis, monitoring and individualize treatment. Finally found that miRNAs represent a great alternative for understanding the molecular basis of implicit tumor processes in breast cancer and once all targets are known, it will be possible to elucidate at least in part this complex and multigenic process, aided by tools such as generation of databases, to report the differential expression of miRNAs, elements that allow us to preventive medicine and improve the quality of life of patients and their families.

Caracterización del perfil quimiosensibilidad y del estado de ampliación génica de un panel de líneas celulares de origen tumoral pulmonar / Characterization of chemosensitivity profile gene amplification status of a panel of lung cancer cell lines

En este trabajo se presentan los resultados de un análisis de amplificación génica y de sensibilidad a fármacos antineoplásicos, realizado para un panel de líneas celulares de origen tumoral pulmonar. Para los ensayos de quimiosensibilidad las células fueron tratadas durante 48 h con concentraciones variables de taxol, cisplatino, doxorrubicina y 5-fluoracilo. La citotoxicidad de los fármacos se cuantificó usando el ensayo de reducción de resazurina y se reportó en valores de concentración inhibitoria 50 (CI50). Para los análisis de amplificación génica se emplearon sondas TaqMan® dirigidas contra los genes AKT2, PIK3CA, ERBB2, EGFR, c-REL y genes de la familia MYC. El número de copias para cada gen fue calculado usando el método de doble delta Ct, empleando ACTB como gen de referencia y la línea MRC-5 como muestra control. Los resultados mostraron que la viabilidad de todas las líneas celulares se afectó por el tratamiento con taxol, cisplatino y doxorrubicina, pero no con el tratamiento con 5-fluoracilo. Las CI50 calculadas se ubicaron entre 0,38 ± 0,03 µM y 111,3 ± 3,58 µM, siendo el taxol y la doxorrubicina los fármacos más potentes. Del panel evaluado las células NCI-H292 resultaron ser las más sensibles y las células LSPG8G las más resistentes a los fármacos. Interesantemente en las células NCI-H292 ningún gen se encontró amplificado; por el contrario en las células LSPG8G los genes cMYC, MYCN, MYCL y AKT2 mostraron un aumento en el número de copias con respecto al de las células control. Estos resultados sugieren que eventos de amplificación génica podrían contribuir con el fenómeno de quimioresistencia en líneas celulares de cáncer de pulmón, sin embargo otros estudios deben realizarse para confirmar esta hipótesis.

In this paper, we show results of anticancer drug sensitivity assays and studies of gen amplification performed for a panel of lung cancer cell lines. For the chemosensitivity assays the cells were treated for 48 h with different concentrations of taxol, cisplatin, doxorubicin and 5-fluorouracil. The cytotoxic effect of each drug was determined using the resazurin reduction assay and reported in terms of inhibitory concentration 50 (IC50). For the analysis of gene amplification we used TaqMan® probes designed against AKT2, PIK3CA, ERBB2, EGFR, REL and MYC family members. Copy number for each gene was calculated using the delta-delta-CT method, employing ACTB as reference gen and MRC-5 cell line as control sample. In the chemosensitivity assays, we observed a clear decrease in cell viability in the cells treated with taxol, cisplatin and doxorubicin but not in the cells treated with 5-fluorouracil. IC50 values ranging between 0,38± 0,03 µM and 111,3 ±3,58 µM, being the taxol and doxorubicin the most potent drugs. NCI-H292 cell line was the most sensitivity and LSPG8G cell line was the most resistant. Interestingly, NCI-H292 cells did not show increase in the copy numbers for the gene evaluated, in contrast, we observed changes in the gene dosage for cMYC, MYCN, MYCL and AKT2 in LSPG8G cells. These results suggest that gene amplification could contribute to drug resistance in lung cancer cell lines; however, more studies are needed to confirm this hypothesis.

Presence and antimicrobial profile of Gram-negative facultative anaerobe rods in patients with chronic periodontitis and gingivitis

La periodontitis crónica es una enfermedad infecciosa multifactorial hacen parte de la microflora subgingival. En los últimos años se han realizado estudios para valorar la presencia de bacilos Gramnegativos anaerobios facultativos (enterobacterias) y suimportancia en el desarrollo y rogresión de la periodontitis crónica. El objetivo de este estudio fue determinar la presencia de enterobacterias en pacientes con periodontitis crónica y gingivitis y conocer la susceptibilidad antimicrobiana de los aislamientosclínicos. Se realizó un estudio observacional y descriptivo en elque se incluyeron 64 pacientes con periodontitis crónica y 22 pacientes con gingivitis. Las muestras tomadas en el surco gingival con conos de papel se depositaron en caldo tioglicolato, seincubaron durante 4 horas a 37 oC y se resembraron finalmente en Agar MacConkey. En la identificación de las bacterias se utilizó el sistema API-20E (Biomerieux, France) y la susceptibilidadantimicrobiana se realizó por el método de difusión en disco. En los dos grupos se identificaron 29 especies enterobacterianas, 7 en el grupo con gingivitis y 22 en el grupo con periodontitis crónica. En el grupo de periodontitis crónica las especies masfrecuentes fueron: K. oxytoca n=5, S. liquefaciens n=4 y K.pneumoniaey E. coli con n=3. En el grupo con gingivitis, Erwiniasp tuvo la mayor frecuencia (n=2). Los aislamientos clínicos presentaron níveles muy bajos de sensibilidad a los B-lactamicosampicilina y amoxicilina/ ac.clavulanico, 17.2 y 27.6 por ciento, y la mayor sensibilidad a ciprofloxacina. En conclusión, la alta frecuencia de enterobacterias en pacientes con periodontitis debe conducir a la prevención y a desarrollar terapias mecánicas y antimicrobianas en las cuales se tengan en cuenta, como parte del tratamiento periodontal, los perfiles antimicrobianos reportados.

EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD CITOTÓXICA Y ANTIMICROBIANA DEL COMPUESTO [Ag(phen)2]salH) / EVALUATION OF THE CITOTOXICITY AND ANTIMICROBIAL ACTIVITY OF THE [Ag(phen)2]salH COMPOUND / AVALIAÇÂO DA ACTIVIDADE CITOTÓXICA E ANTIMICROBIANA DO COMPOSTO [Ag(phen)2]salH

En este artículo se evaluó la actividad antimicrobiana y citotóxica de un nuevo complejo de plata(I) con el ión salicilato y 1,10-fenantrolina. La caracterización de este compuesto se realizó por espectroscopia de resonancia magnética nuclear de protón y carbono-13 (RMN ¹H y 13C), espectroscopia de absorción en la región de infrarrojo (IR), análisis térmico (TG/DSC) y análisis elemental (CHN). Los resultados obtenidos a través de estos métodos sugieren la formación del compuesto con fórmula empírica [Ag(phen)2] salH. Cuando fue comparada la actividad antimicrobiana y citotóxica de este complejo con otros compuestos de plata(I) y cobre(II) de actividad conocida, se observó que el ligante 1,10-fenantrolina incrementa estas propiedades. El compuesto en estudio, presenta la mayor inhibición del crecimiento bacteriano, los microorganismos Gram positivos fueron los más susceptibles. La actividad citotóxica fue evaluada en un panel de cinco líneas celulares tumorales humanas: MDA-MB231, PC-3, HT-29, HEp-2 y A549. A las concentraciones evaluadas, el compuesto produjo una respuesta citotóxica dosis-dependiente en todas las líneas celulares tumorales, particularmente para las líneas tumorales HT-29, MDA-MB231 y A549. Todo esto, sugiere su gran potencial para usos quimioterapéuticos.

This article evaluated the antimicrobial and cytotoxic activity of a new complex of silver(I) with the salicylate ion and 1,10-phenanthroline. The characteriza-tion of this compounds was performed by nuclear magnetic resonance spectroscopy of proton and carbon-13 (RMN ¹H y 13C), spectroscopy absorption in the infrared (IR), thermal analysis (TG/DCS) and elemental analysis (CHN). The results ob-tained through these methods suggest the formation of the compound with empiri-cal formula Ag(phen)2]salH 4. When was compared the antimicrobial activity and cytotoxicity of the complex with other compounds of silver(I) and copper(II) of known activity, we observed that 1, 10-phenalthroline ligand increases these properties. The compound under study has the highest inhibition of bacterial growth, Gram-positive microorganisms were the most susceptible. The cytotoxic activity was tested against a panel of fve human cancer cell lines: MDA-MB231, PC-3, HT-29, HEp-2 and A549. At the concentrations tested, the compound pro-duced a dose-dependent cytotoxic res-ponse against all tumor cell lines, parti-cularly against the HT-29, MDA-MB231 and A549 cell lines. All this suggests its potential chemotherapeutic use.

Neste artigo avaliou-se a atividade antimicrobiana e citotóxica de um novo complexo de prata(I) com o íon sali-cilato e 1,10-fenantrolina. A caracterização deste composto foi realizada por espectroscopia de ressonância magnética nuclear de próton e carbono-13 (RMN ¹H e 13C), espectroscopia de absorção na região de infravermelho (IV), análise térmico (TG/DSC), análi-se elementar (CHN). Os resultados ob-tidos através destes métodos sugerem a formação do composto com fórmula empírica [Ag(phen)2]salH. Quando foi comparada a atividade antimicrobiana e citotóxica deste complexo com outros compostos de prata(I) e cobre(II) de ati-vidade conhecida, observou-se que o ligante 1,10-fenantrolina aumenta essas propriedades. O composto em estudo apresenta maior inibição do crescimento bacteriano, os microorganismos Gram-positivos foram os mais suscetíveis. A atividade citotóxica foi avaliada em um painel de cinco linhas de células tu-morais humanas: MDA-MB231, PC-3, HT-29, HEp-2 e A549. Com as concen-trações avaliadas, o composto deu uma resposta citotóxica dose-dependência em todas as linhagens de células tumo-rais, particularmente para as linhas de células tumorais HT-29, MDA-MB231 e A549. Tudo isso, sugere, um grande potencial para aplicações em quimioterapia.

Implementación de estrategias in vitro para evaluar la funcionalidad de un suero fetal bovino colombiano / Implementation of in vitro strategies to evaluate the functionality of a Colombian fetal bovine serum

En este trabajo se presentan los resultados de las pruebas biológicas realizadas para evaluar la funcionalidad y desempeño del suero fetal bovino de fabricación nacional sobre el crecimiento de cultivos celulares con diversos requerimientos nutricionales. Realizando ensayos de eficiencia de clonaje, eficiencia de plaqueo y curvas de crecimiento sobre líneas celulares y fibroblastos, se demostró que el suero de fabricación nacional puede ser empleado en el cultivo continuo de las líneas A549, PC-3, HT-29, MDA-MB231 con un buen desempeño; y en fibroblastos, las células LSPG8G, MDBK e hibridomas puede ser usado siempre y cuando se emplee al 10% y se realicen cambios de medio al menos cada 48 horas. En ninguno de los ensayos se observó un efecto tóxico o adverso sobre el crecimiento de las células empleadas, aunque en algunos casos se observó una menor funcionalidad frente al crecimiento celular comparando los resultados con otros sueros calificados. Los resultados obtenidos destacan la utilidad del SFB nacional en la aplicación para la propagación de células poco exigentes en ensayos de corta duración, así como en procedimientos transitorios tales como la inactivación de la actividad enzimática de la tripsina y criopreservación.

In this work, we present the results of biological tests performed to evaluate the functionality and performance of fetal bovine serum produced in Colombia, on the growth of cell cultures with different nutritional requirements. Performing cloning efficiency tests, plating efficiency and growth curves of cell lines and fibroblasts, showed that the Colombian serum can be used with a good performance, in continuous culture of cell lines A549, PC-3, HT-29, MDA-MB231, in fibroblasts LSPG8G cells, MDBK and hybridomes can be used in a minimum concentration of 10% and medium every 48 hours. It should be noted that none of the treatments showed a toxic or adverse effect on the growth of the cells used, although in some cases had less functionality compared to cell growth by comparing the results with other qualified serum. Therefore, the Colombian showed to be suitable for the propagation of short-term culture cells, as well as transitional procedures such as trypsin inactivation, and cryopreservation.

Efecto citotóxico de algunos compuestos naturales aislados de plantas Laureaceae y derivados sintéticos / Cytotoxic effect of some natural compounds isolated from Lauraceae plants and synthetic derivatives

Introducción. El efecto contra la proliferación celular de once neolignanos, dos lignanos y un diterpeno, aislados de tres plantas de la familia Lauraceae, y cuatro benzofuranos y dos biciclooctanos sintéticos, fue evaluado in vitro sobre cinco líneas celulares derivadas de tumores sólidos de alta incidencia en Colombia.Objetivo. Evaluar el efecto citotóxico de veinte compuestos sobre las líneas tumorales HeLa, A-549, Hep-2, PC-3 y MCF-7. Materiales y métodos. Los 14 compuestos de origen natural fueron aislados de tres plantas nativas colombianas (Pleurothyrium cinereum, Ocotea macrophylla y Nectandra amazonum) por técnicas cromatográficas y se establecieron sus estructuras por métodos espectroscópicos, y los seis derivados sintéticos fueron preparados mediante reacción de oxiarilación y metilación con diazometano. El efecto contra la proliferación y la recuperación celular se hicieron mediante tratamiento in vitro de las líneas tumorales con los compuestos , evaluando la viabilidad celular por tinción con resazurina.Resultados. Entre los compuestos evaluados, solamente ocofilal A, cinerina D, ácido kaurenoico, dos benzofuranos y la (-)-cinerina A sintética presentaron actividad contra la proliferación celular en diferentes niveles. Los biciclooctanos, así como el ácido kaurenoico, fueron activos contra todas las líneas celulares, mientras que los benzofuranoides mostraron actividad selectiva contra HeLa. Además, la (-)-cinerina A exhibió un efecto letal total contra todas las líneas celulares, mientras que el ácido kaurenóico presentó efecto letal total contra PC-3, Hep-2 y A549.Conclusión. Los compuestos evaluados que exhibieron actividad contra la proliferación celular mostraron resultados interesantes, lo cual sugiere su potencial uso como cabezas de serie o moléculas plantilla en el desarrollo de agentes anticancerígenos.

Introduction. The antiproliferative effect of eleven neolignans, two lignans and one diterpene isolated from three Lauraceae plants, four benzofurans and two bicyclooctanes synthetic derivatives was evaluated in vitro on a set of five human cancer cells from solid tumors with a high incidence in Colombia.Objective. To evaluate the cytotoxic effect of twenty compounds on the tumor cell lines HeLa, A-549, Hep-2, PC-3, and MCF-7.Materials and methods. Fourteen natural compounds were isolated by chromatographic techniques from three native colombian plants (Pleurothyrium cinereum, Ocotea macrophylla and Nectandra amazonum), whose structures were established by spectroscopic methods; six synthetic derivatives were prepared by oxyarylation and diazomethane methylation. Antiproliferative effect and cell recovery were performed by means of in vitro treatment of tumor cell lines with test compounds, evaluating cell viability by resazurin staining.Results. Among test compounds, only neolignans ocophyllal A, cinerin D, kaurenoic acid, two benzofuran-derivatives, and synthetic (-)-cinerin A were found to have antiproliferative effect at different levels. Bicyclooctanoids as well as kaurenoic acid exhibited activity against all human cancer cells while benzofuranoids showed selective activity against HeLa. Furthermore, compounds (-)-cinerin A and kaurenoic acid exhibited total lethal effect against all-five cell lines and PC-3, Hep-2, and A549 cell lines, respectively.Conclusion. Test compounds exhibiting antiproliferative activity showed interesting results, which would promote their use as lead compounds on further studies for anticancer agents development.

Primer reporte de susceptibilidad del clon de caucho natural FX-3864 a Microcyclus ulei en la altillanura colombiana / First report of susceptibility of natural rubber clone FX-3864 a Microcyclus ulei en la altillanuera colombiana

El mal suramericano de las hojas (SALB), enfermedad endémica del caucho (Hevea brasiliensis), es causado por Microcyclus ulei (forma imperfecta Fusicladium macrosporum) y constituye el principal limitante del cultivo en América, área donde el microorganismo patógeno es endémico. En forma semejante al de otros cultivos agrícolas, el manejo de esta enfermedad está condicionado a la disponibilidad de resistencia genética en el hospedero. En razón de su productividad y condición de resistencia genética, el clon FX 3864 ha sido ampliamente plantado en zonas con diferente potencialidad epidémica a la incidencia del SALB en Colombia, particularmente las denominadas de “no escape” a la enfermedad. Durante el 2010, plantaciones con el clon FX 3864 en fase productiva presentaron síntomas de SALB en zonas de escape ubicadas en la altillanura colombiana (departamento del Meta). En parcelas trampa ubicadas en áreas aledañas a los cultivos se estableció que la severidad promedio de la enfermedad alcanzó niveles de 5,78% en este clon. Verificada la causalidad de la enfermedad mediante observaciones al microscopio se procedió a confirmar el origen del material sobre el cual se desarrollaban las lesiones, utilizando marcadores moleculares (4 microsatélites específicos). Los resultados de la prueba permitieron confirmar la susceptibilidad del hasta hace poco resistente clon FX 3864 al SALB en Colombia. Se sugiere tomar en consideración la nueva condición de este clon y, en concordancia, reorientar los programas de fomento del cultivo advirtiendo a los agricultores sobre los riesgos potenciales de ocurrencia de la enfermedad en las nuevas áreas programadas.

South American Leaf Blight (SALB), caused by Microcyclus ulei (anamorph Fusicladium macrosporum), is an endemic major disease of the rubber tree (Hevea brasiliensis) in America. As well as in other crop systems, its management on rubber plantations relies on plant genetic resistance availability, among other means. FX 3864 is a rubber tree clone widely planted in Colombia due to its production capability and disease resistance. During 2010 SALB symptoms developed in commercial crops at the Meta region of Colombia. Crop traps located nearby the plantations showed mean disease severity levels of 5.78%. Once the causal organism was microscopically confirmed as responsible for the diseased tissue, their origin was characterized by molecular means using 4 microsatellites specific to the rubber tree. The procedure confirmed that FX 3864 was the clone of origin of the leaf tissue. SALB occurring over FX 3864 implies the need to redirect crop disease management measures to be followed on the new development areas of rubber cultivation, warning growers about potential hazards of disease incidence.

Detection of gene amplification in MYCN, C-MYC, MYCL1, ERBB2, EGFR, AKT2, and human papilloma virus in samples from cervical smear normal cytology, intraepithelial cervical neoplasia (CIN I, II, III), and cervical cancer / Detección de amplificación en los genes MYCN, C-MYC, MYCL1, ERBB2, EGFR y AKT2 y del virus de papiloma humano en muestras de cepillado cervical en mujeres con citología normal y con neoplasia intraepitelial cervical (NIC) I, II, III y cáncer de cuello uterino

Introduction: Cervical cancer is the second most common cancer among women worldwide and the second cause of cancer mortality in women. It has been demonstrated that the process of cervical carcinogenesis displays genetic and environmental epigenetic components. Currently, research is focused on new prognosis markers like oncogene amplification.Objectives: To perform detection of MYCN, C-MYC, MYCL1, ERBB2, EGFR, and AKT2 amplification. Additionally, to detect human papillomavirus in samples from normal cytology smear, cervical intraepithelial neoplasia (CIN) I, II, and III and cervical cancer patients.Methods: Papillomavirus (HPV) genotyping by reverse line blot (RLB) performed and gene amplification by detection with real-time PCR with Taqman probes.Results: HPV was present in 4% of the patients with normal cytology, 48% in CIN I, 63.6% in CIN II, 64% in CIN III, and 70.8% in cervical cancer. Genes amplified in cervical cancer were MYCN (39.1%), ERBB2 (34.7%), and MYCL1 (30.4%); showed higher amplification in high-grade lesions and cervical cancer in relation to low-grade lesions and normal cytology with statistically significant differences. Besides the genes, C-MYC, EGFR, and AKT2 were amplified in samples from patients with cervical cancer by 12%, 18%, and 13%, respectively; we did not find statistical differences.Conclusion: Higher prevalence of gene amplification and HPV was found in high-grade cervical lesions and cervical cancer.

Introducción: El cáncer cervical es el segundo cáncer más importante en mujeres a nivel mundial y es la segunda causa de muerte por cáncer en mujeres. Se ha demostrado que el proceso de carcinogénesis cervical presenta componentes tanto genéticos como epigenéticos y medio ambientales. En la actualidad, hay gran interés en la búsqueda de marcadores moleculares asociados con la progresión de esta enfermedad, uno de los posibles mecanismos y que además está poco estudiado en cáncer cervical es la amplificación génica de algunos oncogenes como la familia MYC, EGFR y AKT entre otros.Objetivos: Detectar la amplificación génica de MYCN, C-MYC, MYCL1, ERBB2, EGFR y AKT2 además de la presencia del virus de papiloma humano en cepillados cervicales en mujeres con citología normal o con neoplasia intraepitelial cervical (NIC) I, II y III o con cáncer cervical.Métodos: Se genotipificó mediante reverse line blot (RLB) el virus de papiloma humano (VPH) y se determinó el estado de amplificación génica de los genes mencionados mediante PCR en tiempo real utilizando sondas taqman.Resultados: El VPH se encontró presente en 4% de las pacientes con citología normal, en 48% en NIC I, 63.6% en NIC II, 64% en NIC III y 70.8% en cáncer cervical. Los genes MYCN, MYCL1 y ERBB2 mostraron mayor amplificación en lesiones de alto grado y cáncer con diferencias estadísticamente significativas a las lesiones de bajo grado y citología normal, en 39.1%, 34.7% y 30.4% respectivamente. Además, se encontraron amplificados los genes C-MYC, EGFR y AKT2, en muestras de pacientes con cáncer cervical, en 12%, 18% y 13% respectivamente. Sin embargo, no se observaron diferencias estadísticamente significativas con respecto a las lesiones de alto y bajo grado y citología normal.Conclusión: En las lesiones de alto grado como en cáncer cervical, se encuentra mayor prevalencia del virus al igual que se detectan mayor cantidad de alteraciones genéticas como la amplificación génica.

Cytotoxic labdane diterpenoids isolated from the hexane fraction of the Croton stipuliformis stem bark / Diterpenoides labdanos citotóxicos aislados de la fracción hexánica de la corteza de Croton stipuliformis

The composition of the cytotoxic hexane fraction of the Croton stipuliformis bark was studied by meansof a gas chromatography coupled to a mass spectrometry; sesquiterpenes and sterols were characterized as the main constituents. Along with these compounds, three labdane and seco-labdane diterpenoids, 8(17),12E,14-labdatrien-18-oic acid [3], 12E-3,4-seco-labda-4(18),8(17),12,14-tetraen-3-oic acid [2],and its methyl ester [1] were isolated from this fraction through preparative HPLC, and their structures were elucidated by HR-FABMS, 1D and 2D NMR analyses. Additionally, the cytotoxic activity of these three compounds against human tumor cell lines HEp-2, HT-29, MKN-45, MCF-7, and HeLa was assessed. The three compounds showed a non-specific and moderate cytotoxicity against the above mentioned cell lines.

La composición de la fracción hexánica de la corteza de Croton stipuliformis se estudió por cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas; se caracterizaron los sesquiterpenos y esteroles como los principales constituyentes. Adicionalmente a estos compuestos, tres diterpenoides labdanos y seco-labdanos, el ácido 8(17),12E,14-labdatrien-18-oico [3], el ácido 12E-3,4-seco-labda-4(18),8(17),12,14-tetraen-3-oico [2] y su ester metílico [1] se aislaron de esta fracción por HPLC preparativa y sus estructuras seelucidaron con base en los análisis por HRFABMS, espectroscopía de RMN mono y bidimensional. Adicionalmente, se determinó la actividad citotóxica de estos tres compuestos frente a las líneas celulares de tumores humanos HEp-2, HT-29, MKN-45, MCF-7 y HeLa. Todos los compuestos mostraron unacitotoxidad moderada y no específica frente a las líneas celulares mencionadas anteriormente.

Efectos del uso del factor estimulante de colonias granulocíticas en la obtención de células madre en un grupo de pacientes con enfermedad arterial oclusiva crónica / Effects of the use of granulocyte colony stimulating factor for obtaining stem cells in a group of patients with chronic occlusive arterial disease

Es importante evaluar el perfil del uso del factor estimulante de colonias granulocíticas (fec-g) en pacientes con enfermedad arterial oclusiva crónica (eaoc), mediante el análisis de aspectos como eficacia y seguridad. Se examinaron los datos obtenidos de la cohorte de pacientes con eaoc que asistían regularmente a la clínica de Cirugía Vascular del Hospital Militar Central en Bogotá. El protocolo de movilización de células CD34+ hacia sangre periférica consistió en el uso de FEC-Grh a dosis de 600 mg/día por vía subcutánea (Filgrastim fec-g 300 mg Roche®), repartido en dos dosis diarias, en forma continua durante cinco días. Al realizar la comparación de valores a partir de hemogramas realizados antes y después de la movilización, se demostró incremento significativo en el número de leucocitos así como en la proporción de neutrófilos y basófilos; mientras que las proporciones de monocitos, eosinófilos y linfocitos disminuyeron significativamente. Con respecto al comportamiento de las células CD34+, no se muestra una diferencia significativa en el comportamiento del CD34+ con la edad, así como tampoco con el índice de masa corporal (imc). En lo relacionado con el peso y los niveles de CD34+, se observó que los pacientes que lograron una buena respuesta tenían un peso de 59,7 kg, mientras que los pacientes con regular respuesta, 68,1 kg.

The analyzed aspects such as efficacy and safety are important in the use of Granulocyte Colony Stimulating Factor in patients with chronic occlusive arterial disease were analyzed data from the cohort of patients with eaoc that regularly attended the Clinic for Vascular Surgery of the Hospital Militar Central in Bogotá. The protocol for CD34+ cell mobilization into peripheral blood involved the use of FEC-Grh at a dose of 600 mg/day administered subcutaneously (Filgrastim g-csf 300 mg Roche®) divided into two daily doses, continuously for five days. By comparing the values from blood counts performed before and after mobilization showed increased significant number of leukocytes as well as proportion of neutrophils and basophiles, whereas proportions of monocytes, eosinophils and lymphocytes decreased significantly. About the CD34+ cell behavior, it’s not shown significant difference between the behaviors of CD34+ with age, neither the imc. The analyzed done on the weight and CD34+ levels was observed that patients achieved a good response with a weight of 59.7 kg while 68.1 kg patients with regular response.

Genotipificación del Virus del Papiloma Humano(VPH) en muestras de cepillados cervicales de pacientes de diferentes hospitales de Bogotá y evaluación de la concordancia de dos métodos basados en PCR / Genotyping the human papilloma virus (HPV) in Cytobrush samples taken from patients attending different hospitals in Bogotá (Colombia) and evaluating agreement between two PCR-based methods

Objetivo: genotipificar el VPH en muestras de pacientes con diferentes grados histopatológicos de lesión cervical. Materiales y métodos: estudio de corte transversal en muestras de cepillado cervical de mujeres con diferentes grados de lesiones cervicales histopatológicas en la ciudad de Bogotá en el año 2009. Se utilizó Luminex® xMAP® una técnica altamente sensible, reproducible y automatizada, y Reverse Line Blot (RLB). Resultados: las infecciones por los tipos de VPH de 16 y 18 fueron las más frecuentes en todos los tipos de patología del cérvix. Las infecciones mixtas predominaron con un 78,04% de los casos con patología negativa, 85,7% NIC I, 81,25% NIC II, 78,78% NIC III y 71,42% cáncer cervical. La concordancia entre los dos métodos fue del 67%. Conclusión: las infecciones por los tipos de VPH 16 y 18 predominan en la población estudiada.

Objective: genotyping HPV in samples taken from patients having different histopathological degrees of cervical injury. Materials and methods: this was a cross-sectional study of cervical scrape samples taken from females having different degrees of histopathological cervical injury in Bogotá during 2009. Luminex® xMAP® was used, which is a highly sensitive, reproducible and automated technique, as well as reverse line blot (RLB). Results: infections caused by HPV types 16 and 18 were the most frequently found types of pathology of the cervix. Mixed infections predominated (78.04%); amongst cases having negative pathology, 85.7% was found for cervical intraepithelial neoplasia (CIN) I, 81.25% for CIN II, 78.78% for CIN III and 71.42% for cervical cancer. Agreement between both methods was 67%. Conclusion: infection by VPH types 16 and 18 predominated in the population being studied.

Human papillomavirus (HPV) detected in restored plasma DNA from women diagnosed with pre-invasive lesions and invasive cervical cancer / Detección del virus del papiloma humano (VPH) en ADN de plasma restaurado de mujeres en quienes se diagnosticaron lesiones pre-invasivas y cáncer cervical invasivo

Objective: To improve the sensitivity of Human Papillomavirus (HPV) detection in plasma from high-grade cervical neoplasia patients (CIN III) and cervical cancer (CC) evaluating any likely correlation with disease stage.Method: We subjected plasma DNA isolates from 112 patients (CIN and ICC) to a pre-PCR restoration treatment to improve detection sensitivity. HPV-specific sequences were detected by conventional PCR both in cervical scrapes and plasma DNA obtained from each patient. For every single DNA sample, both non-restored and restored isolates were PCR analyzed.Results: We detected HPV in plasma DNA isolates with significantly higher efficiency on restored plasma-DNA as compared to each non-restored equivalent, still maintaining close correlation with the clinical stage of the cases. By analyzing plasma-DNA isolates we could classify as HPV positive >50.0% of the cases that were previously known to be positive from the cervical scrape based assay. Interestingly, 100% of the cases in which subtype HPV18 was detected in cervical scrapes were also positive in plasma DNA.Conclusions: Restoration of plasma DNA from cervical cancer patients allows a more sensitive PCR-based HPV detection, maintaining the correlation to disease stage traditionally observed.

Objetivo: Mejorar la sensibilidad y la detección del virus del papiloma humano (VPH) en el plasma de pacientes con neoplasias intraepiteliales de alto grado (NIEAG) y cáncer de cuello uterino (CCU) para evaluar si existe una relación con el estadío de la enfermedad.Método: Los ADN de plasma aislados de 112 pacientes (NIC y CCU) se sometieron a restauración mediante reacción de la polimerasa en cadena (siglas en inglés, PCR), para mejorar su calidad como sustrato para PCR. En cada paciente se detectaron secuencias específicas del VPH por PCR convencional, tanto en exudados cérvico-vaginales como en ADN del plasma. Por cada muestra se analizaron por PCR, cantidades equivalentes del ADN aislado, tanto no restaurado como restaurado.Resultados: Para las muestras pareadas se pudo detectar VPH en ADN de plasma de forma más eficiente en los materiales restaurados, pues se mantuvo una estrecha correlación con el estadío clínico de los casos. Mediante el análisis de ADN de plasma es posible detectar como VPH positivas más de 50% de los casos que se identificaron previamente como positivos en citología de cuello uterino. Se enfatiza el hecho que 100% de los casos en los que el subtipo VPH18 fue descubierto en exudado cérvico-vaginal también fueron positivos en el ADN de plasma.Conclusiones: El proceso de restauración de ADN de plasma de pacientes con cáncer de cuello uterino permite mejorar la detección de VPH, por PCR, y mantener la correlación con el estadío de la enfermedad.

Cuantificación de ADN libre en plasma sanguíneo de voluntarios sanos en una población bogotana / Quantification of free DNA in blood plasma of healthy volunteers in Bogotá population

El ADN libre en sangre incrementa con algunas condiciones patológicas y ciertos estados fisiológicos. Varios reportes en la literatura han resaltado que el ADN libre en plasma o suero tiene potencial clínico como una posible herramienta para el pronóstico de cáncer en humanos. Sin embargo, hasta el momento no se tienen valores de referencia de individuos sanos con un tamaño de muestra representativo y tampoco se han descrito valores para poblaciones específicas como la bogotana. Es por ello que en el presente estudio se cuantificó la concentración de ADN libre en personas sanas de la población bogotana y así se estableció un rango normal o valor de referencia, adicionalmente se analizó la relación entre los niveles de ADN libre y las características como edad y género. La concentración de ADN libre en la población bogotana fue de 0,72 ng/μL y no se encontraron diferencias significativas entre las edades y los géneros.