ABSTRACT
El diagnóstico de fase en la esquistosomiasis es complejo. Se evaluó la respuesta IgM e IgGmurina contra productos de excreción-secreción de Schistosoma mansoni machos (PESGM), hembras (PESGH) y huevos (PESH), su relación con la histopatología y expresión de IL-10 y TNF-α, mediante ELISA, en suero de ratones Balb/c con 8 y 20 semanas de infección (RI8 y RI20) y Ratones sanos(RS). En RI8, se observaron granulomas constituidos por plasmocitos, macrófagos y neutrófilos, depósitos de colágeno alrededor de los granulomas y en la zona interna del huevo. En R20SI, se observaron fibroblastos alrededor del huevo y acúmulos de macrófagos y plasmocito, aumento de los depósitos de colágeno en áreas del granuloma. IgM sérica RI8, presentó un mayor porcentaje de positividad frente PESGH (35%), mientras que IgG el mayor porcentaje de positividad fue PESGH (60%) y PESH (30%). En R20SI, IgM fue 20% positiva frente PESH e IgG 10% frente PESGM, y 25% positiva con PESGH. No se observaron diferencias en IL-10 entre los RS y RI8. TNF-α en RS vs RI8 y RS vs RI20 fue diferente y estadísticamente significativo. Los PESGH podrían detectar fase aguda y PESH fase crónica. El empleo de varios antígenos sería de utilidad en el diagnóstico de fase.
The diagnosis of schistosomiasis phase is complex. The murine IgM and IgG response against excretory-secretory products of Schistosoma mansoni males (PESGM), females (PESGH) and eggs (PESH), its relation to histopathology and expression of IL-10 and TNF-α was assessed by ELISA in serum of Balb / c mice with 8 and 20 weeks of infection (RI8 and RI20) and healthy mice, RS. In RI8, were observed granulomas consisting of plasma cells, macrophages and neutrophils, deposits of collagen around the granulomas and internal area of the egg. In R20SI, fibroblasts around the egg and accumulation of macrophages and plasmocito, increased collagen deposits in areas of granuloma were observed.RI8 serum IgM had a higher percentage of positivity PESGH (35%), while the highest percentage of IgG positivity was PESGH (60%) and PESH (30%). In R20SI, was 20% IgM positive and IgG against PESH PESGM 10% against and 25% positive with PESGH. No differences in IL-10 between the RS and RI8 were observed. TNF-α in RS vs RI8 and RS vs RI20 was different and statistically significant. The PESGH could detect phase acute while PESH chronic phase. The use of several antigens would be useful in the diagnosis phase.
ABSTRACT
Venezuela se encuentra entre los países sudamericanos afectados por la esquistosomiasis y la quimioterapia con praziquantel (PZQ) es la principal estrategia de control. Se determino el efecto cuantitativo del tratamiento con praziquantel sobre la actividad de la Fosfatasa Alcalina (ALP), Fosfatasa Acida (ACP) y Superoxido Dismutasa (SOD), en antígenos solubles (ASG) y productos de excreción-secreción (PESG) de gusanos hembras y machos condición control (ASGHc, ASGMc, PESGHc and PESGMc) o incubados con PZQ in vitro (ASGMpzq, ASGHpzq, PESGMpzq and PESGHpzq). Las proteínas totales se determinaron por colorimetría, la SOD y ACP mediante espectrofotometría y la ALP por fluorometría. Se encontró una mayor concentración de proteínas en las ASG de gusanos no tratados, y en las preparaciones obtenidas luego de la incubación con PZQ in vitro, en los PESG, un incremento en la actividad ACP en los ASG y PESG preparados con gusanos no-tratados, y una disminución de dicha actividad en los ASG y PESG tratados. La SOD, evidenció en los ASG una disminución estadísticamente significativa en los gusanos tratados. La concentración de la ALP disminuyó significativamente en los ASG y PESGH de gusanos tratados en relación a los gusanos no tratados. En conclusión, se observó una disminución en las proteínas totales, actividades enzimáticas ACP y SOD, y concentración de ALP, en ASG y PESG obtenidos con gusanos tratados.
Venezuela is among South American countries affected by schistosomiasis and chemotherapy with praziquantel (PZQ) is the main control strategy. We determined the quantitative effect of treatment with PZQ on alkaline phosphatase activity (ALP), acid phosphatase (ACP) and superoxide dismutase (SOD) in soluble antigens of worms (SWAP) and excretion-secretion products (EEP) of male and female worms (SMWAPc, SFWAPc, ESPWMc and ESPWHc) or incubated with PZQ in vitro (SMWAP PZQ, SFWAP PZQ, ESPWM PZQ and ESPWH PZQ). Total proteins were determined by colorimetry, SOD and ACP by spectrophotometry and fluorometry ALP. There was higher protein concentration in the untreated worms EG, and the preparations obtained after incubation with PZQ in vitro, in the EG, an increase in ACP activity in the EG and PG prepared with non-treated worms and a decrease of such activity on the EG and treated PG. On the other hand, SOD activity, the EG showed statistical significance in the treated worms. In the PG showed the same behavior, but those differences were not statistically significant. Similarly, there was a decrease in the concentration of ALP noticeable in the EG and worm PGh treated worms relative to untreated statistically significant. In conclusion, we observed a decrease in total protein, ACP and SOD enzyme activities and concentration of ALP, and EG in PG treated worms.
ABSTRACT
Blastocystis sp. es un protozoario controversial en cuanto a su papel patogénico, asociado a enfermedad gastrointestinal, con alta prevalencia. A fin de evaluar signos, síntomas y hallazgos de laboratorio producidos por Blastocystis sp., ratones inmunosuprimidos con dexametasona fueron infectados con morfologías del parásito obtenidos de pacientes sintomáticos y asintomáticos. Los parásitos se aislaron empleando gradiente de densidad con lymphoprep, se realizó semicuantificación de las morfologías presentes en las muestra de heces, y se inocularon 1,6 × 105 parásitos en ratones Balb/c, vía intragástrica. En heces de pacientes sintomáticos se encontraron seis veces más vacuolares que granulares, mientras que en asintomáticos la relación fue apenas dos veces mayor. Los síntomas más frecuentes en los pacientes fueron: flatulencia (85%), dolor de cabeza(62%), dolor abdominal (55%), fiebre (30%) y estreñimiento (8%). La semicuantificación de parásitos por campo en humanos no encontró relación directa entre carga parasitaria y sintomatología gastrointestinal, mientras que en la cuantificación de parásitos por gramo de heces si existió. Los ratones presentaron signos variables luego de la infección, todos aquellos infectados con muestras de pacientes sintomáticos presentaron signos, mientras que solo algunos de los infectados con muestras de pacientes asintomáticos los desarrollaron. Se demostró que no existe relación estadísticamente significativa (p= 0,8) entre la morfología del parásito y los signos manifestados por el ratón; sin embargo hubo una relación estadísticamente significativa (p=0,02) entre las formas vacuolares del parásito y la aparición de síntomas en los pacientes. Se concluye que Blastocystis sp. tiene capacidad de producir signos sugestivos de patología en ratones.
Blastocystis sp. is a controversial protozoan in terms of its pathogenic role associated with high-prevalence gastrointestinal disease. To evaluate signs, symptoms and laboratory findings produced by Blastocystis sp., dexamethasone immunosuppressed mice were infected with parasite morphologies obtained from symptomatic and asymptomatic patients. The parasites were isolated using density gradient with lymphoprep, semi-quantification of the morphologies present in the stool sample was performed and 1.6 × 105 parasites were inoculated into Balb/c mice, intragastrically. In the faeces of symptomatic patients, vacuolar morphology was six times greater than granular morphology, whereas the ratio in asymptomatic patients was only two times greater. The most common symptoms in patients were flatulence (85%), headache (62%), abdominal pain (55%), fever (30%) and constipation (8%). The semi-quantification of parasites per field in humans evidenced no direct relationship between parasite burden and gastrointestinal symptoms, while in parasite quantification per gram of feces, a direct relationship was found. The mice showed variable signs after infection; all those infected with samples from symptomatic patients showed signs, while only some of those infected with samples from asymptomatic patients developed them. It was demonstrated that no statistically significant (p = 0.8) relationship exists between the morphology of the parasite and the signs manifested by the mouse; nevertheless, there was a statistically significant (p = 0.02) relationship between the vacuolar forms of the parasite and onset of symptoms in patients. Conclusions are that Blastocystis sp. is capable of producing signs suggestive of pathology in mice.
Subject(s)
Humans , Male , Female , Child , Mice , Blastocystis/isolation & purification , Blastocystis/virology , Bacterial Infections/parasitology , Blastocystis Infections/pathology , Immunosuppressive Agents/analysis , Diarrhea/parasitology , Diarrhea/pathology , Abdominal Pain/parasitology , Abdominal Pain/pathology , Fever/parasitology , Fever/pathology , Flatulence/parasitology , Flatulence/pathologyABSTRACT
La respuesta granolomatosa en animales infectados con Schistosoma mansoni es atribuida a la presencia del huevo y aunque los gusanos adultos co-existentes en el sistema porta hepático, el papel en la inmunopatología no está claro. Se evaluó la respuesta celular hepática en ratones Balb/c infectados unisexualmente (UNI) con cercarias de S. mansoni, mediante histología convencional, inmunofluorescencia para CD4+ y CD8+, inmunohistoquímica e inmunomicroscopía electrónica para macrófagos activados. Los resultados muestran que la infección UNI produjo un infiltrado hepático con un área de 33,9 ± 18,86 µm² (media ± ME), constituido por macrófagos, linfocitos, plasmocitos y escasos eosinófilos. En la infección bisexual, la composición celular fue similar pero más intensa con un área de 195,6 ± 74,4 µm². Las células CD4+ y CD8+ en el hígado se ubicaron entre 2 y 4 cel/ µm² cerca del gusano y distante en forma difusa o en grupos, en ambas condiciones de infección. Los macrófagos activados se ubicaron alrededor de los gusanos y en donde se deposita el pigmento esquistosiomal. Los resultados sugieren que el gusano adulto es capaz de inducir una respuesta inflamatoria hepática en ausencia del huevo, la cual debe jugar un papel importante en la respuesta producida contra el huevo y tienen implicaciones en la patogénesis de la esquistosomiasis murina
Subject(s)
Animals , Mice , Infections , Larva , Murinae , Schistosoma mansoni , Parasitology , VenezuelaABSTRACT
Se evaluaron los cambios morfológicos y ultraestructurales de la transformación in vitro de miracidios (M) de Schistosoma mansoni aislado Puerto Rico (PR), incubados en RPMI-1640 por 30 min para su transformación a esporoquiste madre (EM), seguido de 16 h en medio Hansen. Se determinó la viabilidad por la integridad del sistema protonefrigial y la exclusión del azul tripano; el tamaño y la morfología se evaluó mediante microscopía de luz y electrónica de transmisión. La microscopía de luz mostró a los 30 min pérdida del movimiento y desprendimiento del epitelio ciliado. Posteriormente los esporoquistes se observan extendidos con movimientos vermiformes y las células con flama activas: con una viabilidad de 76 por ciento a los 5 días y 50 por ciento al día 11 de cultivo, aumentando su tamaño 3 veces (300 µm) para el día 16. La microscopía electrónica reveló a 24 h de cultivo cambios en composición y distribución del tegumento, observándose polisomas libres y microvellocidades en la capa externa del tegumento, al día 7 la membrana externa de EM se muestra delgada con bolsas germinativas en su interior u gránulos proteicos electrón densos. El sistema protonefrigial está intacto a las 24 h de cultivo, observándose células en flama con 11 pares de microtúbulos periféricos. Se concluye que la transformación in vitro del M en medio axénico se acompaña de cambios importantes en la superficie del tegumento y cambios ultraestructurales
Subject(s)
Animals , In Vitro Techniques , Microscopy, Electron , Organizers, Embryonic , Schistosoma mansoni/isolation & purification , Parasitology , VenezuelaABSTRACT
Biomphalaria glabrata and Schistosoma mansoni relationship was studied by light microscopy (LM) and freeze-fracture replica technique (FFR). We observed very thin cytoplasmic extensions of hemocytes in the LM, which then surround immobilize the miracidia. FFR images showed that the contact site between hemocytes cytoplasmic extensions and the external tegumentary coat involved only superficial layers of miracidia. Numerous vacuoles and filopodia were observed in the hemocyte cytoplasm, the latter binding with those from neighboring cells. In spite of the close interfilopodia contact, no cellular junctions were seen at these sites nor between filopodia-miracidia contact areas. The observed migration of hemocytes and their disposition in layers surrounding the miracidia in vitro correspond to previous studies.