Caracterização e identificação de uma proteina secretada no sobrenadante de culturas celulares infectadas por toxoplasma gondii

A toxoplasmose é uma infecção causada por um protozoário com ampla propagação na natureza. É uma zoonose de felídeos com características próprias, na qual o parasita, Toxoplasma gondii, infecta células nucleadas de vários animais na escala zoológica. No Brasil a incidência é alta em várias regiões do país e acomete indivíduos de todas as esferas sociais. As lesões mais sérias são encontradas em mulheres que adquiriram a infecção durante o período de gestação, pessoas que sofrem de algum tipo de imunossupressão ou imunocompetentes que tiveram a infecção mal diagnosticada e não receberam tratamento adequado. Durante o estabelecimento da doença, diferentes processos acontecem no hospedeiro em resposta à entrada dos parasitas nas células. As proteínas produzidas pelo parasita são responsáveis por vários fenômenos envolvendo interações entre os organismos. Elas participam dos mecanismos de escape do sistema imune e estabelecem condições de permanência do parasita na célula. O presente estudo teve como objetivo analisar proteínas de Toxoplasma gondii liberadas no sobrenadante de culturas de células infectadas, identificá-las e avaliar sua capacidade imunogênica. Foram utilizados taquizoítos para infectar células VERO. Os sobrenadantes resultantes das culturas foram retirados em diferentes tempos após a infecção, filtrados e concentrados. A análise por SDS-PAGE mostrou a presença de uma proteína majoritária com massa molecular de cerca de 70 kDa. Pelas análises realizadas neste estudo, acreditamos que esta proteína é liberada no momento em que o parasita penetra na célula hospedeira. O concentrado protéico foi purificado por cromatografia de troca iônica e, com a proteína de 70 kDa purificada, determinamos os primeiros 20 aminoácidos da região N-terminal. A seqüência é inédita pois quando foi comparada com as já descritas na literatura não foi observada nenhuma homologia. Soros de indivíduos portadores de toxoplasmose apresentam alta reatividade contra a proteína...

Caracterização e identificação de uma proteina secretada no sobrenadante de culturas celulares infectadas por toxoplasma gondii / Characterization and identification of a secreted protein in the swimming of infected cultures cellular for toxoplasma gondii

A toxoplasmose é uma infecção causada por um protozoário com ampla propagação na natureza. É uma zoonose de felídeos com características próprias, na qual o parasita, Toxoplasma gondii, infecta células nucleadas de vários animais na escala zoológica. No Brasil a incidência é alta em várias regiões do país e acomete indivíduos de todas as esferas sociais. As lesões mais sérias são encontradas em mulheres que adquiriram a infecção durante o período de gestação, pessoas que sofrem de algum tipo de imunossupressão ou imunocompetentes que tiveram a infecção mal diagnosticada e não receberam tratamento adequado. Durante o estabelecimento da doença, diferentes processos acontecem no hospedeiro em resposta à entrada dos parasitas nas células. As proteínas produzidas pelo parasita são responsáveis por vários fenômenos envolvendo interações entre os organismos. Elas participam dos mecanismos de escape do sistema imune e estabelecem condições de permanência do parasita na célula. O presente estudo teve como objetivo analisar proteínas de Toxoplasma gondii liberadas no sobrenadante de culturas de células infectadas, identificá-las e avaliar sua capacidade imunogênica. Foram utilizados taquizoítos para infectar células VERO. Os sobrenadantes resultantes das culturas foram retirados em diferentes tempos após a infecção, filtrados e concentrados. A análise por SDS-PAGE mostrou a presença de uma proteína majoritária com massa molecular de cerca de 70 kDa. Pelas análises realizadas neste estudo, acreditamos que esta proteína é liberada no momento em que o parasita penetra na célula hospedeira. O concentrado protéico foi purificado por cromatografia de troca iônica e, com a proteína de 70 kDa purificada, determinamos os primeiros 20 aminoácidos da região N-terminal. A seqüência é inédita pois quando foi comparada com as já descritas na literatura não foi observada nenhuma homologia. Soros de indivíduos portadores de toxoplasmose apresentam alta reatividade contra a proteína. Ela mostrou-se também altamente específica para T. gondii, pois soros de indivíduos saudáveis ou de outras infecções não foram reativos para protéina em ELISA e "Immunoblot". Anticorpos de camundongos imunizados com a proteína reconheceram especificamente em "Immunoblot", lisado bruto de taquizoítos. Estes dados sugerem que a proteína de cerca de 70 kDa participa do processo entrada dos taquizoítos na célula hospedeira e desencadeia uma resposta imune importante. Contudo, mais estudos devem ser...

Avaliaçäo do kit Totaltest comparado com as técnicas de sedimentaçäo espontânea, Rugai e Kato-Katz, no exame parasitológico de fezes / Coprotest kit valuation in comparison with spontaneous sedimentation's technic, Rugai and Kato-Katz methods, in feces parasitological examination

Na tentativa de se buscar novos métodos diagnósticos aplicáveis em Laboratório de Saúde Pública que sejam práticos e eficientes, säo lançados no mercado, vários kits para exames parasitológicos de fezes, voltados à melhoria da qualidade nos resultados. A Seçäo de Enteroparasitoses avaliou o kit Totaltest em 114 amostras de fezes, comparativamente aos métodos de sedimentaçäo espontânea, Rugai e Kato-Katz, realizados rotineiramente em nosso laboratório. O laudo emitido sobre o referido kit evidenciou que ovos de Trichuris trichiura, por exemplo, näo eram visualizados com a mesma frequência que na utilizaçäo dos métodos acima citados. Com o objetivo de se alcançar melhores resultados, foram efetuadas pequenas modificaçöes na técnica preconizada pelo fabricante do Totaltest, e 128 amostras de fezes foram submetidas ao mesmo estudo comparativo. Os resultados obtidos após estas modificaçöes, revelaram equivalência quanto à positividade de helmintos e protozoários entre os métodos rotineiramente utilizados em nosso laboratório e o kit testado. O totaltest mostrou ser um kit prático e rápido, com economia de espaço físico, com reduçäo de material reutilizado (lavagem de vidraria), garantindo também a conservaçäo das amostras de fezes em formalina a facilitar sobremaneira a pesquisa de parasitas oportunistas. Os autores discutem as modificaçöes realizadas no roteiro recomendado pelo fabricante do kit, que permitiram uma reprodutibilidade maior dos resultados em relaçäo à rotina da Seçäo de Enteroparasitoses do Instituto Adolfo Lutz