Leishmania (L.) amazonensis infection impairs reproductive and fetal parameters in female mice / La infección por Leishmania (L.) amazonensis afecta parámetros reproductivos y fetales en ratones hembras

ABSTRACT Leishmaniasis is a group of parasitic zoonotic diseases caused by intracellular protozoans belonging to the genusLeishmania. Little is known about the effects that this parasitosis may have on the reproductive parameters and pregnancy of infected humans and pets. This study aimed to evaluate the influence of chronic cutaneous leishmaniasis caused byLeishmania (Leishmania) amazonensison reproductive and fetal parameters using a female murine model. A control group of female BALB/c mice and a group infected withL. (L.) amazonensiswere mated with healthy males. Clinical parameters were monitored during the pre-mating and gestational periods. Female mice were euthanized on day 19 of gestation, when the fetuses were weighed and their length measured and embryonic resorptions and fetal death were recorded. We observed five fetal deaths and three embryonic resorptions in the infected group. Furthermore, there was a decrease in fertility in the infected group (26.32%). The weight of the offspring from infected mothers was lower than that in the control group (1.019±0.035g and 1.163±0.032g,p<0.01). Fetal length was reduced in the infected group (3.71±0.05cm in the control group and 3.40±0.06cm in the infected groupp<0.001). This study shows that cutaneous leishmaniasis caused byL. (L.) amazonensisimpairs reproductive and fetal parameters in mice.

RESUMEN La leishmaniasis comprende un grupo de enfermedades zoonóticas parasitarias causadas por protozoos intracelulares pertenecientes al géneroLeishmania. Poco se conoce sobre los efectos que esta parasitosis puede tener sobre los parámetros reproductivos y la gestación en humanos y en otras especies infectadas. El objetivo de este estudio fue determinar la influencia de la leishmaniasis cutánea crónica, causada porLeishmania (Leishmania) amazonensis, en parámetros reproductivos y fetales. Se apareó un grupo control y un grupo infectado de ratones hembra BALB/c (previamente inoculado conL. (L.) amazonensis) con machos sanos. Se analizaron parámetros clínicos durante los períodos pregestacional y gestacional. Las hembras fueron eutanasiadas en el día 19 de gestación, momento en el cual se pesaron y midieron los fetos y se registraron las reabsorciones embrionarias y las muertes fetales. Se observaron 5 muertes fetales y 3 reabsorciones embrionarias en el grupo infectado. Además, hubo una disminución en la fertilidad de este último grupo (26,32%). Por otra parte, el peso de la descendencia de madres infectadas fue menor que el del grupo control (1,019±0,035g y 1,163±0,032g, respectivamente,p<0,01). Por último, la longitud fetal se redujo en el grupo infectado (3,71±0,05cm en el grupo control y 3,40±0,06cm en el grupo infectado,p<0,001). Este estudio muestra que la leishmaniasis cutánea causada porL. (L.) amazonensisafecta los parámetros reproductivos y fetales en ratones.

Evaluation of different total Leishmania amazonensis antigens for the development of a first-generation vaccine formulated with a Toll-like receptor-3 agonist to prevent cutaneous leishmaniasis

BACKGROUND Unfortunately, no any vaccine against leishmaniasis has been developed for human use. Therefore, a vaccine based on total Leishmania antigens could be a good and economic approach; and there are different methodologies to obtain these antigens. However, it is unknown whether the method to obtain the antigens affects the integrity and immune response caused by them. OBJECTIVES to compare the protein profile and immune response generated by total L. amazonensis antigens (TLA) produced by different methods, as well as to analyse the immune response and protection by a first-generation vaccine formulated with sonicated TLA (sTLA) and polyinosinic:polycytidylic acid [Poly (I:C)]. METHODS TLA were obtained by four different methodologies and their integrity and immune response were evaluated. Finally, sTLA was formulated with Poly (I:C) and their protective immune response was measured. FINDINGS sTLA presented a conserved protein profile and induced a strong immune response. In addition, Poly (I:C) improved the immune response generated by sTLA. Finally, sTLA + Poly (I:C) formulation provided partial protection against L. amazonensis infection. MAIN CONCLUSIONS The protein profile and immune response depend on the methodology used to obtain the antigens. Also, the formulation sTLA + Poly (I:C) provides partial protection against cutaneous leishmaniasis in mice.

Leishmaniasis mucocutánea con manifestacion oral: reporte de un caso / Mucocutaneous leishmaniasis with oral manifestation: case report

La Leishmaniasis es un grupo de enfermedades transmitidas por vectores y causada por la Leishmania, un parásito intracelular, que se presenta de preferencia en regiones tropicales y subtropicales. Se manifiesta mediante un amplio rango de formas clínicas como la cutánea, mucocutánea, y visceral, dependiendo de la especie y respuesta inmunológica del paciente. Se presenta el caso de un hombre de 35 años que acudió derivado a Unidad de Estomatología del Hospital Señor del Milagro, Salta, Argentina, presentando en la cavidad oral lesión, granulomatosa, ulcerada, dolorosa a la palpación, única, en paladar blando, de tres meses de evolución. Se realizaron estudios serológicos, parasitológicos y PCR. Los ELISAs lisados, PCRs y cultivos de materiales de lesiones fueron positivos, confirmando diagnóstico de leishmaniasis mucocutánea. El paciente fue derivado al Servicio de Dermatología donde recibió tratamiento con Antimoniato de Meglumina, con repuesta clínica favorable. El conocimiento de las manifestaciones orales puede llevar al diagnóstico clínico de leishmaniasis mucocutánea por parte del odontólogo, pudiendo entregar un tratamiento oportuno y a la vez ayudar al paciente, evitando complicaciones de esta enfermedad.

Leishmaniasis is a group of vector-borne diseases caused by Leishmania, an intracellular parasite, which occurs preferentially in tropical and subtropical regions. It manifests itself through a wide range of clinical forms such as cutaneous, mucocutaneous, and visceral, depending on the species and the patient's immune response. We present a case of a 35-year-old man who was referred to the Stomatology Unit of the Señor del Milagro Hospital, Salta, Argentina, presenting in the oral cavity lesion, granulomatous, ulcerated, painful on palpation, unique, soft palate with three months of evolution. Serological, parasitological and PCR studies were performed. Lysed ELISAs, PCRs and cultures of lesion materials were positive, confirming diagnosis of mucocutaneous leishmaniasis. The patient was referred to the Dermatology Service where he received treatment with Meglumine Antimony, with favorable clinical response. The knowledge of the oral manifestations can lead to the clinical diagnosis of mucocutaneous leishmaniasis by the dentist, being able to provide timely treatment and at the same time help the patient, avoiding complications of this disease.

Uso de la reacción en cadena de la polimerasa para el control terapéutico de la infección crónica por trypanosoma cruzi / Use of the polymerase chain reaction (pcr) for the therapeutic control of chronic trypanosoma cruzi infection

En las normas actuales de tratamiento etiológico de la fase crónica tardía de la enfermedad de Chagasen Argentina, Brasil y la Organización Mundial de la Salud, se recomienda controlar la eficaciaterapéutica con pruebas serológicas y parasitológicas convencionales. Sin embargo las primerassuelen continuar positivas 10 años o más luego del tratamiento, y las segundas son, en general, debaja sensibilidad en esta etapa de la enfermedad. La Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR)al ser más sensible que los exámenes parasitológicos convencionales, podría informar con unacobertura mayor si hubo falla terapéutica. Hemos ofrecido tratamiento con benznidazol (5 mg/kg/día, por 60 días) a 138 pacientes de 16 a 35 años de edad, infectados crónicamente con Trypanosomacruzi. La eficacia terapéutica se controló con PCR periódicas, hemocultivo y serología convencionalen dos grupos de pacientes: uno (GT, 57 pacientes) que aceptó y cumplió el tratamiento y otro(GNT, 37 pacientes) que lo rechazó. Antes de la administración de benznidazol la PCR mostró unasensibilidad diagnóstica de 41 por ciento (57/138 pacientes) y el hemocultivo 7,2 por ciento (10/138). Sesenta mesespostratamiento el grupo GT mostró una positividad de PCR acumulada de 28,1 por ciento (16/57) y el grupoGNT 54,1 por ciento (20/37; p=0.0016). A pesar de que la sensibilidad diagnóstica de PCR es limitada, lanegatividad de pruebas repetidas con método normatizado podría evidenciar disminución de laparasitemia o probable curación en 71,9 por ciento de los pacientes tratados, lo que habría que confirmar conel seguimiento serológico...

Current norms for the etiological treatment of chronic Chagas disease, recommended by WHOor currently in force for Argentina and Brazil, advise the control of therapeutic efficacy usingconventional serological and parasitological tests. However, serology usually remains positive 10 ormore years after treatment and parasitological tests are insensitive in the chronic stage. PolymeraseChain Reaction (PCR) is more sensitive than parasitological tests and could provide earlier evidenceof therapeutic failure. We offered benznidazole treatment (5 mg/kg/day, 60 days) to 138 patients(age=16 to 35 years old), chronically infected with Trypanosoma cruzi. Therapeutic efficacy waschecked with periodic PCR, haemoculture and conventional serology in two groups of patients: One(TG) accepting and complying with treatment and the other (NTG) rejecting it. Before benznidazoleadministration, PCR displayed a diagnostic sensitivity of 41.3 percent (57/138) and haemoculture 7.2 percent(10/138). Sixty months after treatment, TG displayed a cumulated PCR positivity of 28.1 percent (16/57)and NTG 54.1 percent (20/37; p=0.0166). Even though the sensitivity of PCR is limited, repeated negativeresults of a standardized method may reveal lower parasitaemia or probable cure, in 71.9 percent of treatedpatients, to be confirmed with serological follow up...

Lupus eritematoso sistémico asociado al consumo crónico de cocaína / Systemic lupus erythematosus associated with chronic cocaine use

El lupus eritematoso sistémico (LES) es una enfermedad autoinmune, de etiología desconocida,que se manifiesta como una enfermedad sistémica pleomórfica, afectando,principalmente, a las mujeres. El mecanismo autoinmune del LES se ha visto asociado aldesarrollo del fenómeno de la célula LE. Este fenómeno consiste en la fagocitosis, por partede los neutrófiflos, de los núcleos liberados por las células opsonizadas por el anticuerpoanti-DNP y el complemento C3b. A partir de diferentes estudios, se ha visto relación multifactorialetiológica en la inducción de enfermedades autoinmunes, en la que se encuentrauna relación infrecuente con el consumo crónico de cocaína. Esto se explica a través deprocesos biológicos en los que se inhibe la fagocitosis de los restos celulares generados pordichas enfermedades. A continuación se presenta el caso de un paciente con antecedentede consumo de derivados de la benzoilecgonina, quien ingresa por manifestaciones constitucionales,pulmonares, renales, cutáneas y musculoesqueléticas, en quien los paraclínicosy la biopsia renal confirman el diagnóstico de LES con nefritis lúpica clase iv. Así mismo, sedestaca la relevancia de sospecha y diagnóstico temprano de dicha enfermedad y la correlacióncon el consumo de cocaína para dar tratamiento oportuno y evitar el progreso y suscomplicaciones...

Niveles séricos de ceruloplasmina y mieloperoxidasa en pacientes con enfermedad coronaria crónica / Serum levels of ceruloplasmin and myeloperoxidase in patients with stable coronary artery disease / Níveis séricos de ceruloplasmina e mieloperoxidase em pacientes com doença coronariana crônica

La ceruloplasmina (CP) es una proteína que participa en el metabolismo del hierro y transporta el 95% del cobre plasmático. Se considera un inhibidor fisiológico de la mieloperoxidasa (MPO), enzima leucocitaria que forma parte del sistema inmune innato. Ambas se postulan como biomarcadores de la enfermedad cardiovascular. El objetivo del presente trabajo fue determinar la actividad de CP y la concentración de MPO en pacientes con enfermedad coronaria crónica (ECC) y analizar su asociación con otros parámetros de inflamación. Se estudiaron 22 pacientes con ECC y 22 controles sanos. La actividad de CP fue determinada por el método de Ozcan Erel y las concentraciones de MPO, proteína C- reactiva ultrasensible (PCR-us) e Interleuquina 6 (IL-6) por métodos estandarizados. La concentración de MPO y la actividad de CP fueron mayores en pacientes con ECC que en sujetos sanos; (417±295 vs. 179±145 ng/mL, p=0,0018); (891±179 vs. 630±115 IU/L, p< 0,0001) respectivamente y la asociación entre las variables fue estadísticamente significativa (r=0,47, p=0,0272). La liberación sistémica de MPO que conduce a valores incrementados de su concentración sérica, y la hiperceruloplasminemia podrían considerarse un rasgo característico de ECC asintomática e indicarían aterosclerosis en pacientes que eventualmente desarrollen ECC.

Immunological correlates of cure in the first American Cutaneous Leishmaniasis patient treated by immunotherapy in Argentina: A case report. / Correlatos inmunológicos de curación en el primer paciente con Leishmaniasis Cutánea Americana tratado con inmunoterapia en Argentina: Reporte de un caso

A patient with localized cutaneous leishmaniasis due to Leishmania (Leishmania) amazonensis infection was treated with an antigen containing heat-killed L. (L.) amazonensis promastigotes plus BCG. Expression of T-cell differentiation, memory and senescence receptors markers were analyzed on T cell subpopulations, in order to establish the correlation between the percentages of expression of these receptors and his clinical status, at different stages of his follow up. The following case reports on the achievement of a successful clinical outcome with complete resolution after receiving immunotherapy. A thorough clinical and immunological follow up supporting the healing process of this patient’s lesion is presented in detail.

Un paciente con leishmaniasis cutánea localizada producida por Leishmania (Leishmania) amazonensis fue tratado con un antígeno compuesto por promastigotes de L. (L.) amazonensis muertos por calor combinado con BCG. Se analizó la expresión de distintos receptores de diferenciación, de memoria y de senescencia en las subpoblaciones de células T, con el fin de establecer una relación entre los porcentajes de expresión de dichos receptores y la clínica del paciente en diferentes momentos del seguimiento. Se reporta en este caso un resultado exitoso, con resolución completa de la lesión después de recibir la inmunoterapia, y se presenta en detalle un seguimiento clínico e inmunológico completo durante el proceso de curación.

Susceptibilidad de distintas cepas de ratones a la infección por Leishmania amazonensis / Susceptibility of different mouse strains to Leishmania amazonensis infection

Antecedentes. En el modelo murino más estudiado, producido por L, major, se observa correlación entre cepas resistentes (C57BL6) y susceptibles (BALB/c), con respuestas inmunes Th1 o Th2, respectivamente. Esta dicotomía no se observa en modelos desarrollados con otras especies de Leishmania (L). Por ello es importante avanzar en el estudio de modelos experimentales con especies predominantes de nuestra zona. El objetivo fue reproducir la enfermedad en diferentes cepas murinas luego de la infección por L. amazonensis. Métodos. Para conocer el efecto de la variable cepa de ratones sobre la susceptibilidad a la infección por L. amazonensis, se aplicó un inóculo constante del parásito a las cepas en estudio. Se evaluó la respuesta de las cepas C57BL/6, BALB/c y Swiss, por medición de lesiones, estimación de carga parasitaria e histopatología. Por ELISA se determinaron anticuerpos y citoquinas en suero. Test estadístico: análisis de la varianza (ANOVA). Resultados. BALB/c demostró máxima susceptibilidad a la infección; Swiss presentó un fenotipo intermedio, y C57BL/6 fue la menos susceptible. Se obtuvieron modelos murinos que reprodujeron distintas formas clínicas comparables a la enfermedad humana. Conclusiones. Los resultados servirán para extrapolar a la patología humana las conclusiones de posteriores ensayos terapéuticos y profilácticos sobre animales experimentales.

Background.Most studies have been based onL. majormouse mo-dels, where Th1 and Th2 immune responses are associated with resistant(C57BL/6) and susceptible (BALB/c) strains, respectively. This dichotomyis not generally observed in models developed with otherLeishmania (L.)species. Therefore, the study of mouse models involving species respon-sible for human infections in our region represents an important challen-ge. The aim was to induce the disease in diff erent mouse strains after theinfection withL. amazonensis.Methods.To study the eff ect of “mice strain” variable over “susceptibilityforL. amazonensisinfection”, a constant parasite inoculum was appliedto the studied mice strains. Response to infection was characterized inC57BL/6, BALB/c, and Swiss strains by lesion measurement, parasitic loadestimate and histological analysis. Serum presence of antibodies andcytokines was determinated by ELISA. Statistical analysis: ANOVA test.Results.BALB/c showed the maximum level of susceptibility towardsthe infection. Swiss demonstrated an intermediate phenotype andC57BL/6 was the most resistant strain. We could obtain murine modelsrefl ecting diff erent clinical forms present in human disease.Conclusions.These results will be useful to extrapolate to human pa-thology future conclusions about therapeutic and prophylaxis analysison experimental models (Dermatol Argent 2009;15(5):334-339)

Ceruloplasmina: determinación de su actividad ferroxidasa / Ceruloplasmin: measurement of serum ferroxidase activity

La Ceruloplasmina (Cp) es la principal proteína transportadora de cobre en circulación. Su concentración es abundante en plasma; se considera un reactante de fase aguda y su función fisiológica no se encuentra fehacientemente establecida. Fundamentalmente se sintetiza en los hepatocitos. También se encuentra en otros tipos celulares como monocitos, astrocitos y células de Sertoli. Su concentración sérica se utiliza en el diagnóstico diferencial de enfermedad de Wilson. La concentración total en plasma se considera igual a la suma de las concentraciones de apo y holo Cp, de manera que la cantidad de esta proteína determinada por un método inmunológico no indica que la enzima se encuentre presente solamente en su forma activa. Entonces, al utilizar esta metodología, se sobreestima la proteína funcionalmente activa. Existen diversos métodos para determinar su actividad. En este trabajo se describe un método automatizado para medir su actividad ferroxidasa que utiliza iones Fe2+ como sustrato. Los valores de referencia de actividad de Cp se diferenciaron estadísticamente entre el grupo de mujeres y el de hombres, siendo de 424-796 UI/L y 397-733 UI/L, respectivamente. Además, se obtuvo una correlación significativa entre la actividad ferroxidasa y la concentración proteica (r=0,7285; p<0,0001).

Ceruloplasmin (Cp) is the principal copper carrier in human plasma. It is an abundant protein that participates in the acute phase reaction to stress, but its physiological function is unknown. Althought Cp is synthesised predominantly in the liver, other cell types express the protein, including monocytes, astrocytes and Sertoli cells. The serum concentration of the copper protein ceruloplasmin has been an important diagnostic indicator of Wilson`s disease. Measurement of the total amount of Cp protein may not reflect Cp enzyme activity in the serum. The immunologic assay may lead to overestimation of the total amount of functional Cp in the serum due to this method's capacity to determine both the functional holo Cp and non-functional apo Cp. Several methods for determining ferroxidase activity have been reported. In this study, a method is described for automated measurement of the activity. In this method, Fe2+ ions are used as the substrate. The range for serum Cp ferroxidase activity in healthy persons was 424-796 UI/L for women, and 397-733 UI/L for men. Significant correlations between serum ferroxidase activity and Cp concentration (r=0,7285; p < 0,0001) were found.