Ca(OH)2 action on TNF-alpha and NO release in macrophage culture stimulated by Pseudomonas aeruginosa LPS / Ação do Ca(OH)2 sobre a produção de TNF-alfa e NO de cultura de macrófagos estimulada por LPS de Pseudomonas aeruginosa

Purpose: Calcium hydroxide [Ca(OH)2] interaction with the immune system to destroy or neutralize bacteria and their by-products is not completely understood. This study evaluated the calcium hydroxide ability to neutralize Pseudomonas aeruginosa lipopolysaccharides (LPS) using two different methods: nitric oxide (NO) stimulation and Tumoral Necrosis Factor-alpha (TNF-alpha) release in mice macrophage culture. Methods: For the NO assay, peritoneal exudate cells (PECs) were placed in contact with 25ìg/mL and 50ìg/mL LPS and LPS/Ca(OH)2 suspensions (50ìg/25mg and 25ìg/25mg). After incubation for 8h, Griess reagent was used, and the NO release was quantified. In the TNF-alpha assay the LPS solution was tested in 25ìg/mL, and the LPS/Ca(OH)2 suspension was tested in 25ìg/25mg concentration. After incubation for 24 hours, cells were fixed and stained with crystal violet. Absorbance values were obtained. Results were expressed in micromols. All tests were performed in triplicate. Results: The presence of Ca(OH)2 in both tested concentrations significantly reduced NO and TNF-alpha release. Conclusion: It can be concluded that bacteria LPS is a strong stimulus for NO and TNF-alpha release, but calcium hydroxide can neutralize it.

Objetivo: A ação do hidróxido de cálcio [Ca(OH)2] com o sistema imune e o mecanismo de neutralização das bactérias e seus subprodutos ainda não foi completamente esclarecida. Neste estudo foi avaliada a capacidade do Ca(OH)2 em neutralizar o lipopolissacarídeo (LPS) de Pseudomonas aeruginosa, utilizando-se duas metodologias: liberação de Óxido Nítrico (NO) e Fator de Necrose Tumoral Alfa (TNF-alfa) em cultura de macrófagos peritoneais de camundongos. Metodologia: No ensaio do NO, as células peritoneais foram expostas a uma solução de LPS (25mg/mL e 50mg/mL); e à suspensão de LPS/Ca(OH)2 em duas concentrações (50mg/ 25mg e 25mg/25mg). Após 8 horas de incubação, foi utilizado reagente de Griess, e a liberação de NO foi quantificada. No ensaio do TNF-alfa, a solução de LPS foi usada na concentração de 25mg/mL e o LPS/Ca(OH)2 a 25mg/25mg. Após 24 horas, as células foram fixadas e coradas com cristal violeta, e os valores de absorbância foram obtidos. Os resultados foram expressos em micromols. Todos os testes foram realizados em triplicata. Resultados: A presença de Ca(OH)2 nas duas concentrações avaliadas reduziu significativamente a liberação de NO e TNF-alfa. Conclusão: Pode-se concluir que o LPS bacteriano representa um forte estímulo para liberação destas citocinas, mas o hidróxido de cálcio foi capaz de neutralizar este efeito.

Evaluation of cytotoxicity of two endodontic cements in a macrophage culture

Comparativamente à guta-percha, os cimentos endodônticos são utilizados em pequena quantidade nas obturacões dos canais radiculares, mas são imprescindíveis para obtencão do hermético selamento marginal, sendo sua biocompatibilidade dependente do somatório das respostas de cada célula presente na região periapical. Por conseguinte, o objetivo deste estudo foi avaliar em cultura de macrófagos peritoneais de seis camundongos Swiss, a citotoxicidade de dois cimentos endodônticos, um à base de resina epóxica (Sealer 26) e outro contendo óxido de zinco e eugenol (Endofill), quanto a inducão da producão de óxido nítrico. Após a presa e pulverizacão, alíquotas de 100ml da suspensão contendo 18mg/mL dos respectivos cimentos foram adicionados em placa de cultura de tecido de 96 pocos, contendo a cultura de macrófagos na concentracão de 5,0X106 células/ml. Após 48 horas de incubacão, a 37ºC, em 5% de CO2, foi feita a leitura em um leitor ELISA automático para se averiguar a liberacão de óxido nítrico. Verificou-se, para o cimento Sealer 26, que a producão de óxido nítrico oscilou de 36,1 a 313,0 mmols, com média de 143,82n111,03, enquanto para o Endofill estes valores foram significativamente menores (p=0.01), variando de 50,8 a 125,7, com média de 80.33n28,42 mols. Nos grupos controles positivo e negativo a média de liberacão de óxido nítrico foi de 162,75mmols e 4,42mmols, respectivamente. Não houve diferenca significativa entre o grupo controle positivo e o cimento Sealer 26 (p>0.05). Portanto, o cimento Sealer 26 causou, significativamente, maior toxicidade aos macrófagos, possivelmente devido aos seus componentes, a exemplo da resina epóxica e ao formaldeído, liberados durante a sua reacão de polimerizacão.

Citotoxidade dos cimentos endodônticos topseal e sealer 26 em culturas de macrófagos: avaliação da produção de óxido nítrico / Citotoxicity of topseal and sealer 26 endodontic cements in macrophage culures: nitric oxide production assesment

Avaliou-se a produção de óxido nítrico em cultura de macrófagos peritoneais de camundogos Swiss, frente a dois cimentos endodonticos um à base de resina epóxica, Topseal e outro à base de hidróxido de calcio, Sealer 26. Após a proporção, espatulação, presa e pulverização, alíquotas de 100ml da suspensão contendo 9mg/mL dos respetctivos cimentos foram adicionados em placa de cultura de tecido de 96 orifícios, contendo cultura de macrófagos a 5,0X10 a sexta células/ml. Após 48 horas de incubação, a 37°C, em 5 por cento de CO2, determinou-se a concentração de óxido nítrico no leitor ELISA automático. Para o cimento Topseal, a produção de óxido nítrico variou de 76,5 a 113,6umols enquento para o Sealer 26 os valores variaram de 55,8 a 243,3umols. Por conseguinte, mediante a produção de óxido nítrico, o Sealer 26 causou, significativamente, maior toxicidade aos macrófagos.